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asako2010

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条带问题 已有12人参与

请问各位大神第一张图是什么情况?我是PCR完了跑胶的。为什么只有拖带没有目的条带呢?第二张图条带很淡要怎么样条带才能亮啊?

PCR条带问题
IMG_9737.JPG


PCR条带问题-1
IMG_9728.JPG
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asako2010

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-22 02:48:14
两张图里很明显的引物二聚,说明引物几乎没有结合模板。按照你所说的之前能扩增出来,现在扩不出来,那么你的PCR的温度应该是没有问题的。有可能出问题的方面有:
1. 污染。包括引物,水,Buffer和酶等等。确定你跟 ...

谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
25楼2014-07-25 13:57:49
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xzy0425

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-07-20 20:40:21
你上边的两个图均属于PCR条件没有摸清楚造成的目的基因没扩出来或扩的不多不理想。PCR的目的是扩增目的基因,以获得大量的目的产物进行下一步操作。为了高效获得目的产物,我们必须确定最佳的PCR条件,构建最合适的PCR体系。PCR体系包括:模板、引物、底物、酶、缓冲液、双蒸水。根据引物序列,推测出退火的最适温度,确定PCR反应参数,然后确定PCR体系应加的各成分的最适量。摸索PCR体系及参数时,我们使用的是小体系,如20μl。待条件确定后,再进行体系扩大,最好是体系不变,管数增加,这样有利于获得理想的结果,因为有时候单纯等体积扩大体系难以获得理想结果。

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2楼2014-07-20 18:59:03
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leonaliu2013

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-20 20:40:29
降低退火温度试一下,你的引物二聚体很亮,也有可能是两个引物的序列容易形成二聚体。个人建议,先降低退火温度,最低退火温度可以使48度,如果还是无法使目的条带变亮,那么重新设计引物。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2014-07-20 19:34:54
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asako2010

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xzy0425 at 2014-07-20 18:59:03
你上边的两个图均属于PCR条件没有摸清楚造成的目的基因没扩出来或扩的不多不理想。PCR的目的是扩增目的基因,以获得大量的目的产物进行下一步操作。为了高效获得目的产物,我们必须确定最佳的PCR条件,构建最合适的 ...

谢谢啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-07-21 13:34:40
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