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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条带问题
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asako2010

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条带问题 已有12人参与

请问各位大神第一张图是什么情况？我是PCR完了跑胶的。为什么只有拖带没有目的条带呢？第二张图条带很淡要怎么样条带才能亮啊？

PCR条带问题
IMG_9737.JPG


PCR条带问题-1
IMG_9728.JPG
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asako2010

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1楼 2014-07-20 18:41:53
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asako2010

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-22 02:48:14
两张图里很明显的引物二聚，说明引物几乎没有结合模板。按照你所说的之前能扩增出来，现在扩不出来，那么你的PCR的温度应该是没有问题的。有可能出问题的方面有：
1. 污染。包括引物，水，Buffer和酶等等。确定你跟 ...

谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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25楼2014-07-25 13:57:49
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xzy0425

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-20 20:40:21
你上边的两个图均属于PCR条件没有摸清楚造成的目的基因没扩出来或扩的不多不理想。PCR的目的是扩增目的基因，以获得大量的目的产物进行下一步操作。为了高效获得目的产物，我们必须确定最佳的PCR条件，构建最合适的PCR体系。PCR体系包括：模板、引物、底物、酶、缓冲液、双蒸水。根据引物序列，推测出退火的最适温度，确定PCR反应参数，然后确定PCR体系应加的各成分的最适量。摸索PCR体系及参数时，我们使用的是小体系，如20μl。待条件确定后，再进行体系扩大，最好是体系不变，管数增加，这样有利于获得理想的结果，因为有时候单纯等体积扩大体系难以获得理想结果。
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asako2010
2楼2014-07-20 18:59:03
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leonaliu2013

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-20 20:40:29
降低退火温度试一下，你的引物二聚体很亮，也有可能是两个引物的序列容易形成二聚体。个人建议，先降低退火温度，最低退火温度可以使48度，如果还是无法使目的条带变亮，那么重新设计引物。
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asako2010
3楼2014-07-20 19:34:54
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asako2010

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xzy0425 at 2014-07-20 18:59:03
你上边的两个图均属于PCR条件没有摸清楚造成的目的基因没扩出来或扩的不多不理想。PCR的目的是扩增目的基因，以获得大量的目的产物进行下一步操作。为了高效获得目的产物，我们必须确定最佳的PCR条件，构建最合适的 ...

谢谢啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-07-21 13:34:40
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