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lingbi

银虫 (正式写手)

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[求助] T载体上的酶切位点已有3人参与

正在设计目的基因，上下游分别是EcoRI \BamHI ,请问，如果我将PCR产物连在T载体上送测序，回头再将目的片段切下来可不可以？看到T载上也有这两个位点会不会切下来的切多了连在表达载体上读码框移位之类的麻烦？请问大家怎么解决的？

T.jpg

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1楼2014-02-23 16:31:04

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atlanticwi

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:47:13
lingbi: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-02-24 12:15:38

...
问题1. 可以T载体测序后再酶切连接目的载体但其实最后在目的载体上测序比较合适
问题2. 载体自有酶切位点的，很有可能会干扰你的酶切位点的酶切，所以请选用pMD19-T (simple)型T载体，此T载体没有MCS区域，或使用其他没有你酶切位点的T载体，如pGEM-T型就没有EcoRI和BamHI
祝实验顺利