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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 可容纳大片段的载体
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bingdong05

银虫 (正式写手)

[求助] 可容纳大片段的载体 已有3人参与

最近准备做克隆，可目的片段太长，几个片段加起来约20kb，不知道利用什么载体及宿主菌合适，望知道的虫友不吝赐教，多谢。
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1楼 2014-02-11 09:59:12
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回帖置顶 ( 共有1个 )

huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
bingdong05(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-15 00:11:43
bingdong05: 金币+3 2014-02-18 16:55:46
gyesang: 回帖置顶 2014-03-30 00:20:56
cosmid啊。。。果断用这个。。。。然后配有特殊的大肠杆菌
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6楼2014-02-14 21:17:47
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普通回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)
没人理我啊，自己顶
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2楼2014-02-14 08:38:23
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bingdong05: 金币+5, ★有帮助 2014-02-14 12:18:48
20kb一般宿主菌都可以接受。载体一般的就可以，效率低些但还是能做的。
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hehe
3楼2014-02-14 09:27:45
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bingdong05

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-02-14 09:27:45
20kb一般宿主菌都可以接受。载体一般的就可以，效率低些但还是能做的。

多谢了哈，可效率低啊，目的转化子很少，兄弟能提供几个常用的容纳大片段的质粒及宿主吗
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4楼2014-02-14 12:19:47
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
bingdong05: 金币+3 2014-02-18 16:55:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by bingdong05 at 2014-02-14 12:19:47
多谢了哈，可效率低啊，目的转化子很少，兄弟能提供几个常用的容纳大片段的质粒及宿主吗...

我们也是用DH5a，质粒也是常见的一些，PCAMIB1300，pGWB系列的。
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hehe
5楼2014-02-14 15:19:48
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2014神虫浮云

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-15 16:56:12
bingdong05: 金币+3 2014-02-18 16:56:00
酵母人工染色体（YAC)是人工染色体中能克隆最大DNA片段的载体，可以插入100-2000kb的外源DNA片段。YAC是有酵母的自主复制序列、着丝点、四膜虫的端粒以及酵母选择性标记组成的酵母线性克隆载体。左臂含有端粒、酵母筛选标记Trp1、自主复制序列ARS和着丝粒，右臂含有酵母筛选标记Ura3和端粒，然后在两臂之间插入大片段DNA构成的。
　　优点
　　可以容纳更长的DNA片段，用较少的克隆就可以包含特定的基因组全部序列，从而保持了基因组特定序列的完整性，有利于物理图谱的制作。
　　缺点
　　（1）克隆外源基因易出现嵌合体。
　　（2）有些克隆不稳定。
　　（3）YAC克隆不容易与酵母自身染色体相分离。
　　应用领域
　　在染色体区带构建YAC重叠群，可以促进大规模基因组测序和致病基因的克隆。
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ffgtfvtyju7hjhv
7楼2014-02-15 11:03:29
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2014神虫浮云

铁虫 (初入文坛)
gyesang: 屏蔽内容 2014-02-15 16:56:22
本帖内容被屏蔽
8楼2014-02-15 14:27:13
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