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bingdong05

银虫 (正式写手)

应助: 15 (小学生)
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虫号: 281641
注册: 2006-09-23
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 可容纳大片段的载体已有3人参与

最近准备做克隆，可目的片段太长，几个片段加起来约20kb，不知道利用什么载体及宿主菌合适，望知道的虫友不吝赐教，多谢。

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1楼 2014-02-11 09:59:12

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2014神虫浮云

铁虫 (初入文坛)

应助: 9 (幼儿园)
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虫号: 2968452
注册: 2014-02-14
性别: GG
专业: 实验动物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-15 16:56:12
bingdong05: 金币+3 2014-02-18 16:56:00

酵母人工染色体（YAC)是人工染色体中能克隆最大DNA片段的载体，可以插入100-2000kb的外源DNA片段。YAC是有酵母的自主复制序列、着丝点、四膜虫的端粒以及酵母选择性标记组成的酵母线性克隆载体。左臂含有端粒、酵母筛选标记Trp1、自主复制序列ARS和着丝粒，右臂含有酵母筛选标记Ura3和端粒，然后在两臂之间插入大片段DNA构成的。
　　优点
　　可以容纳更长的DNA片段，用较少的克隆就可以包含特定的基因组全部序列，从而保持了基因组特定序列的完整性，有利于物理图谱的制作。
　　缺点
　　（1）克隆外源基因易出现嵌合体。
　　（2）有些克隆不稳定。
　　（3）YAC克隆不容易与酵母自身染色体相分离。
　　应用领域
　　在染色体区带构建YAC重叠群，可以促进大规模基因组测序和致病基因的克隆。