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lingbi

银虫 (正式写手)

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[求助] T载体上的酶切位点已有3人参与

正在设计目的基因，上下游分别是EcoRI \BamHI ,请问，如果我将PCR产物连在T载体上送测序，回头再将目的片段切下来可不可以？看到T载上也有这两个位点会不会切下来的切多了连在表达载体上读码框移位之类的麻烦？请问大家怎么解决的？

T.jpg

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1楼 2014-02-23 16:31:04

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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:47:20
lingbi: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-02-24 12:16:01

在T载体上测序确定正确之后再亚克隆比较好。这样可以保证PCR之后的产物是正确的。一般亚克隆不会改变目的基因的序列。而且酶切问题，只要酶切位点外侧有几个保护碱基，就会消化干净，所以此处不必担心酶切不完全的问题。祝顺利！

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