应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » T载体上的酶切位点
51/1返回列表
查看: 3530  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lingbi

银虫 (正式写手)

[求助] T载体上的酶切位点 已有3人参与

正在设计目的基因，上下游分别是EcoRI \BamHI ,请问，如果我将PCR产物连在T载体上送测序，回头再将目的片段切下来可不可以？看到T载上也有这两个位点会不会切下来的切多了连在表达载体上读码框移位之类的麻烦？请问大家怎么解决的？
T载体上的酶切位点
T.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-23 16:31:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:47:20
lingbi: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-02-24 12:16:01
在T载体上测序确定正确之后再亚克隆比较好。这样可以保证PCR之后的产物是正确的。一般亚克隆不会改变目的基因的序列。而且酶切问题，只要酶切位点外侧有几个保护碱基，就会消化干净，所以此处不必担心酶切不完全的问题。祝顺利！
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-23 20:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:47:13
lingbi: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-02-24 12:15:38
...
    问题1. 可以T载体测序后再酶切连接目的载体 但其实最后在目的载体上测序比较合适
    问题2. 载体自有酶切位点的，很有可能会干扰你的酶切位点的酶切，所以请选用pMD19-T (simple)型T载体，此T载体没有MCS区域，或使用其他没有你酶切位点的T载体，如pGEM-T型就没有EcoRI和BamHI
    祝实验顺利
赞一下(1人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2014-02-23 16:38:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lingbi: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-02-24 12:15:53
这个没有问题，酶切时间长些可以完全酶切这些片段不会影响下一步连接。
赞一下 回复此楼
hehe
3楼2014-02-23 19:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingbi

银虫 (正式写手)
明白了，谢谢大家帮忙！
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-24 12:16:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂； 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料类求调剂 +6 wana_kiko 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:20 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 284求调剂 +4 天下熯 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:13 by gaoxiaoniuma
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂；
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 面上可以超过30页吧？ +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭