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柠檬m97

银虫 (小有名气)

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[求助] 怎么判断非特异性扩增已有3人参与

我最近在做某中药ISSR单因素考察，好多文献上说引物或dNTP等浓度过高会引起错配以及非特异性扩增，我怎么判断是非特异性扩增而不是就该跑出来的条带呢。。。。

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1楼2014-01-17 10:05:32

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zhaozhibozhi

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引用回帖:

9楼: Originally posted by 柠檬m97 at 2014-01-18 15:49:22
恩有道理！我控制所有产地DNA的量试试~

还有个问题，我正交做完是不是还得考察循环次数呢...

你优化体系的目的，是不同重复之间出现稳定的、可分辨的条带，也就是避免出现“uneven amplification of some loci”。只要达到这个目的就行。

至于循环次数，可以考察一下。它所带来的影响和其它因素差不多，过高也容易出现非特异性、不稳定条带。总之，最终拿到条带明亮、重复之间稳定的方案就万事ok了。

预祝顺利