应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么判断非特异性扩增
101/1返回列表
查看: 3785  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

柠檬m97

银虫 (小有名气)

[求助] 怎么判断非特异性扩增 已有3人参与

我最近在做某中药ISSR单因素考察，好多文献上说引物或dNTP等浓度过高会引起错配以及非特异性扩增，我怎么判断是非特异性扩增而不是就该跑出来的条带呢。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-17 10:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Be_Abuse

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-17 12:47:41
是定量PCR还是普通pcr，出现非特异扩增的因素很多，引物的设计、浓度、dNTP和模版的浓度都会有影响。如果是普通PCR要看条带是否单一，定量的话加个溶解曲线看下是否是特异扩增。
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-17 10:48:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-17 13:05:22
就单因素，做浓度梯度
赞一下 回复此楼
做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2014-01-17 12:54:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rebubble

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先根据条带的位置比对DNA分子的大小是否对
觉得差不多大小再测序一下
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-17 14:29:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬m97

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Be_Abuse at 2014-01-17 10:48:45
是定量PCR还是普通pcr，出现非特异扩增的因素很多，引物的设计、浓度、dNTP和模版的浓度都会有影响。如果是普通PCR要看条带是否单一，定量的话加个溶解曲线看下是否是特异扩增。

普通PCR，用来比较不同产地的。下面是正交结果图，就是像第三条就比第二条上面多了个条带，就不知道这个条带是不是错配啥的。。。
怎么判断非特异性扩增
正交.jpg
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-17 22:25:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬m97

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-01-17 12:54:59
就单因素，做浓度梯度

恩，做了呢，下面的图考察的是DNA的浓度，第七个条带就上面多出一条来，不太明白啊，不知道怎么选择了。
怎么判断非特异性扩增-1
DNA.jpg
赞一下 回复此楼
6楼2014-01-17 22:28:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬m97

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by rebubble at 2014-01-17 14:29:09
先根据条带的位置比对DNA分子的大小是否对
觉得差不多大小再测序一下

我只做ISSR，所以只看条带特异性，不知道DNA分子应该多大呢。。
赞一下 回复此楼
7楼2014-01-17 22:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 18:02:26
引用回帖:
6楼: Originally posted by 柠檬m97 at 2014-01-17 22:28:11
恩，做了呢，下面的图考察的是DNA的浓度，第七个条带就上面多出一条来，不太明白啊，不知道怎么选择了。

DNA.jpg
...

个人觉得，这可以指导你统计数据。比如在某DNA浓度之上，开始出现某条带，那么你处理不同样品时，就需要注意DNA浓度了。如果你所有样品dna浓度都在这个阈值之上，就可以统计这条带；如果有高有低，这条带就不能反应真实情况。所以，该结果可以指导你的不同样品的DNA要选定一个浓度范围。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

柠檬m97
做一个阳光、开朗的小和尚
8楼2014-01-18 10:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬m97

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-01-18 10:21:14
个人觉得，这可以指导你统计数据。比如在某DNA浓度之上，开始出现某条带，那么你处理不同样品时，就需要注意DNA浓度了。如果你所有样品dna浓度都在这个阈值之上，就可以统计这条带；如果有高有低，这条带就不能反应 ...

恩 有道理！我控制所有产地DNA的量试试~
还有个问题，我正交做完是不是还得考察循环次数呢
赞一下 回复此楼
9楼2014-01-18 15:49:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 柠檬m97 at 2014-01-18 15:49:22
恩 有道理！我控制所有产地DNA的量试试~
还有个问题，我正交做完是不是还得考察循环次数呢...

你优化体系的目的，是不同重复之间出现稳定的、可分辨的条带，也就是避免出现“uneven amplification of some loci”。只要达到这个目的就行。

至于循环次数，可以考察一下。它所带来的影响和其它因素差不多，过高也容易出现非特异性、不稳定条带。总之，最终拿到条带明亮、重复之间稳定的方案就万事ok了。

预祝顺利
赞一下 回复此楼
做一个阳光、开朗的小和尚
10楼2014-01-18 17:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 柠檬m97 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 274求调剂 +5 S.H1 2026-03-18 5/250 2026-03-18 21:27 by guosr9609
[考研] 281求调剂（0805） +6 烟汐忆海 2026-03-16 15/750 2026-03-18 21:12 by Gaodh_82
[考研] 271材料工程求调剂 +4 .6lL 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:05 by 楤哥
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 9/450 2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭