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柠檬m97

银虫 (小有名气)

[求助] 怎么判断非特异性扩增已有3人参与

我最近在做某中药ISSR单因素考察,好多文献上说引物或dNTP等浓度过高会引起错配以及非特异性扩增,我怎么判断是非特异性扩增而不是就该跑出来的条带呢。。。。
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柠檬m97

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-01-18 10:21:14
个人觉得,这可以指导你统计数据。比如在某DNA浓度之上,开始出现某条带,那么你处理不同样品时,就需要注意DNA浓度了。如果你所有样品dna浓度都在这个阈值之上,就可以统计这条带;如果有高有低,这条带就不能反应 ...

恩 有道理!我控制所有产地DNA的量试试~
还有个问题,我正交做完是不是还得考察循环次数呢
9楼2014-01-18 15:49:22
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Be_Abuse

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-17 12:47:41
是定量PCR还是普通pcr,出现非特异扩增的因素很多,引物的设计、浓度、dNTP和模版的浓度都会有影响。如果是普通PCR要看条带是否单一,定量的话加个溶解曲线看下是否是特异扩增。
2楼2014-01-17 10:48:45
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-17 13:05:22
就单因素,做浓度梯度
做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2014-01-17 12:54:59
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rebubble

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先根据条带的位置比对DNA分子的大小是否对
觉得差不多大小再测序一下
4楼2014-01-17 14:29:09
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