24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 6521  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 以质粒为模板做pcr时要不要稀释? 已有4人参与

我新设计的引物在5端突变了几个碱基,以前的引物以质粒为模板扩增不出来,而以双酶切产物的话就能扩增出来,现在新设计的引物下游引物不变,上游引物突变了几个碱基,以质粒和双酶切产物为模版都扩增不出来呢,这是为什么?是不是以质粒为模板时一般要进行稀释,要比pcr双酶切产物浓度低才可以?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heihei2866

铁虫 (正式写手)


gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-11 23:37:19
我们一般都稀释100倍左右再做模板
6楼2014-01-11 09:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:07
以质粒为模板,PCR要求浓度在0.1-10ng 之间 就可以 了
2楼2014-01-10 09:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-10 11:19:32
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:09
有时候懒得计算质粒浓度,一般是50ul体系里面加入0.1~0.5ul的质粒作为模板。这里说的质粒是提取出来正常的浓度,就是比marker最亮的条带都亮很多,亮到刺眼的那种。有时候也会稀释5~10倍后再加0.5~1ul
你的日子如何,你的力量也必如何!
3楼2014-01-10 10:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:50:49
质粒需要稀释一下,我们一般都是稀释100-1000倍再做PCR
hehe
4楼2014-01-10 12:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 310求调剂 +10 666真好 2026-04-11 11/550 2026-04-11 23:09 by 852137818
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[基金申请] 山东省基金2026 +4 jerry681 2026-04-08 5/250 2026-04-11 13:59 by laobibibi
[考研] 一志愿211生物学280分 求调剂 +7 李rien 2026-04-05 7/350 2026-04-11 11:16 by 逆水乘风
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 本科西工大 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:00 by 来看流星雨10
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 一志愿沪9,326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +22 土豆er? 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 10:58 by 高维春
[考研] 调剂 +24 不逢春 2026-04-07 25/1250 2026-04-10 09:39 by 690616278
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南科大生物学297分,求调剂推荐 +8 Y-yyusx 2026-04-06 9/450 2026-04-07 19:38 by biomichael
[考研] 专硕085403,291分,有两篇专利,一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
[考研] 085602调剂 初试总分335 +10 19123253302 2026-04-05 10/500 2026-04-07 15:23 by 小乔同学ya
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
信息提示
请填处理意见