应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 以质粒为模板做pcr时要不要稀释？
51/1返回列表
查看: 6336  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 以质粒为模板做pcr时要不要稀释？ 已有4人参与

我新设计的引物在5端突变了几个碱基，以前的引物以质粒为模板扩增不出来，而以双酶切产物的话就能扩增出来，现在新设计的引物下游引物不变，上游引物突变了几个碱基，以质粒和双酶切产物为模版都扩增不出来呢，这是为什么？是不是以质粒为模板时一般要进行稀释，要比pcr双酶切产物浓度低才可以？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-10 08:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heihei2866

铁虫 (正式写手)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-11 23:37:19
我们一般都稀释100倍左右再做模板
赞一下 回复此楼
6楼2014-01-11 09:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:07
以质粒为模板，PCR要求浓度在0.1-10ng 之间 就可以 了
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-10 09:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-10 11:19:32
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:09
有时候懒得计算质粒浓度，一般是50ul体系里面加入0.1～0.5ul的质粒作为模板。这里说的质粒是提取出来正常的浓度，就是比marker最亮的条带都亮很多，亮到刺眼的那种。有时候也会稀释5～10倍后再加0.5～1ul
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
3楼2014-01-10 10:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:50:49
质粒需要稀释一下，我们一般都是稀释100-1000倍再做PCR
赞一下(1人) 回复此楼
hehe
4楼2014-01-10 12:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭