24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 6515  |  回复: 5

574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 以质粒为模板做pcr时要不要稀释? 已有4人参与

我新设计的引物在5端突变了几个碱基,以前的引物以质粒为模板扩增不出来,而以双酶切产物的话就能扩增出来,现在新设计的引物下游引物不变,上游引物突变了几个碱基,以质粒和双酶切产物为模版都扩增不出来呢,这是为什么?是不是以质粒为模板时一般要进行稀释,要比pcr双酶切产物浓度低才可以?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:07
以质粒为模板,PCR要求浓度在0.1-10ng 之间 就可以 了
2楼2014-01-10 09:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-10 11:19:32
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:09
有时候懒得计算质粒浓度,一般是50ul体系里面加入0.1~0.5ul的质粒作为模板。这里说的质粒是提取出来正常的浓度,就是比marker最亮的条带都亮很多,亮到刺眼的那种。有时候也会稀释5~10倍后再加0.5~1ul
你的日子如何,你的力量也必如何!
3楼2014-01-10 10:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:50:49
质粒需要稀释一下,我们一般都是稀释100-1000倍再做PCR
hehe
4楼2014-01-10 12:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxwu10016869

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
574759350: 金币+2 2014-01-10 13:50:40
引物5‘端碱基突变后,不能与模板配对,退火温度应降低。
5楼2014-01-10 13:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heihei2866

铁虫 (正式写手)


gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-11 23:37:19
我们一般都稀释100倍左右再做模板
6楼2014-01-11 09:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 574759350 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211,0703化学305分求调剂 +26 严西西戏 2026-04-06 33/1650 2026-04-11 23:01 by 314126402
[考研] 0854调剂 +8 长弓傲 2026-04-11 9/450 2026-04-11 21:44 by 蓝云思雨
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 化工求调剂! +35 RichLi_ 2026-04-06 35/1750 2026-04-11 11:02 by zhq0425
[考研] 调剂 +4 电气300求调剂不 2026-04-08 7/350 2026-04-11 10:44 by 紫曦紫棋
[考研] 296求调剂 +13 汪!?! 2026-04-10 15/750 2026-04-11 10:31 by 逆水乘风
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸,感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 273求调剂 +51 麦小叮当 2026-04-06 58/2900 2026-04-10 15:54 by jiajinhpu
[考研] 材料专硕调剂 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-09 21:16 by wutongshun
[考研] 332,085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 327求调剂 +10 Xxjc1107. 2026-04-06 11/550 2026-04-09 01:21 by lature00
[考研] 专硕0854初试考材科基,求调剂 +7 3220548044 2026-04-06 10/500 2026-04-08 21:59 by hypershenger
[考研] 266调剂 +8 daya sun 2026-04-07 9/450 2026-04-08 20:27 by yutian743
[考研] 一志愿南昌大学,085600,344分求调剂 +11 调剂上岸玘 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:17 by luoyongfeng
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 考研调剂 +3 Wwwwwww哇 2026-04-06 3/150 2026-04-06 20:55 by lbsjt
[考研] 生物与医药求调剂 +7 heguanhua 2026-04-05 8/400 2026-04-06 18:41 by macy2011
[考研] 324求调剂 +3 k可乐 2026-04-05 4/200 2026-04-06 09:54 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见