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铁虫 (小有名气)

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[求助] 以质粒为模板做pcr时要不要稀释？已有4人参与

我新设计的引物在5端突变了几个碱基，以前的引物以质粒为模板扩增不出来，而以双酶切产物的话就能扩增出来，现在新设计的引物下游引物不变，上游引物突变了几个碱基，以质粒和双酶切产物为模版都扩增不出来呢，这是为什么？是不是以质粒为模板时一般要进行稀释，要比pcr双酶切产物浓度低才可以？

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1楼 2014-01-10 08:55:28

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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
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574759350: 金币+2 2014-01-10 13:50:40

引物5‘端碱基突变后，不能与模板配对，退火温度应降低。

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