24小时热门版块排行榜    

查看: 4560  |  回复: 7

rainbow8

新虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR整个质粒的问题

各位虫友好,我的问题概括起来说就是:我需要从一个8k的质粒上p大约7k的片段,就是只有1k的片段我不要。质粒是环形的,不线性化。请问我p出来的条带跑电泳看怎么都是8k的,不会把整个质粒都p出来了吧。我的引物不包括我不要那一部分的序列啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

学海无涯,回头是岸
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莹莹陀zws

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那就是你没有扩出来,很常见的失败现象
悲伤着你的悲伤,幸福着你的幸福
2楼2012-06-01 16:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个电泳有时候不好说,做胶做不好也会有各个泳道迁移率一样的情况,重新跑电泳看看,如果你知道质粒序列的话可以正反向测序各测一个反应,看看是不是你想要的那部分~~~~~
如果楼主真是知道质粒的序列,那应该问题不大~~~~
3楼2012-06-01 17:10:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道楼主是否有特殊需要必须经过PCR扩增质粒片段。为了避免扩增整个质粒,也可以找合适位点对质粒酶切,跑胶,把7kb那部分切胶回收,作为模板PCR。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2012-06-01 22:52:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
嗯...................
        据我实验中的结果,凡是在7K以上的迁移率几乎都是有很微小的差别的 除非你的胶足够软(低于0.7%)且两条带差据2kb以上 电泳实验还要足够长些 才能有肉眼看到差别的
       别太在意迁移率 如果量足够大 回收了做个酶切也可以鉴定哦
       个人看法 若有说错请高手指点
Let God do with it as He wills
5楼2012-06-01 23:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

OMG 自己打出一堆错别字.........................真是实验做晕了
Let God do with it as He wills
6楼2012-06-02 00:00:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

435632866

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑电泳时可以把质粒也点上作对照,应该就能看的清楚些。
7楼2012-06-03 06:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看看你的序列中有没有酶切位点,有的话我酶切下看看,然后分析下!
每天坚持多一点,以后困难少一点!
8楼2012-06-03 11:02:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rainbow8 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 4/200 2026-11-09 16:48 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见