应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 以质粒为模板做pcr时要不要稀释？
51/1返回列表
查看: 6517  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 以质粒为模板做pcr时要不要稀释？ 已有4人参与

我新设计的引物在5端突变了几个碱基，以前的引物以质粒为模板扩增不出来，而以双酶切产物的话就能扩增出来，现在新设计的引物下游引物不变，上游引物突变了几个碱基，以质粒和双酶切产物为模版都扩增不出来呢，这是为什么？是不是以质粒为模板时一般要进行稀释，要比pcr双酶切产物浓度低才可以？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-10 08:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-10 11:19:32
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:09
有时候懒得计算质粒浓度，一般是50ul体系里面加入0.1～0.5ul的质粒作为模板。这里说的质粒是提取出来正常的浓度，就是比marker最亮的条带都亮很多，亮到刺眼的那种。有时候也会稀释5～10倍后再加0.5～1ul
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
3楼2014-01-10 10:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:07
以质粒为模板，PCR要求浓度在0.1-10ng 之间 就可以 了
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-10 09:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:50:49
质粒需要稀释一下，我们一般都是稀释100-1000倍再做PCR
赞一下(1人) 回复此楼
hehe
4楼2014-01-10 12:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxwu10016869

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+2 2014-01-10 13:50:40
引物5‘端碱基突变后，不能与模板配对，退火温度应降低。
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-10 13:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +15 ORCHID1 2026-04-10 16/800 2026-04-12 00:45 by 蓝云思雨
[考研] 291求调剂 +10 关忆北. 2026-04-09 11/550 2026-04-12 00:45 by xuxiang
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 296求调剂 +13 汪！？！ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 10:31 by 逆水乘风
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 282，求调剂 +12 jggshjkkm 2026-04-09 14/700 2026-04-11 09:39 by 猪会飞
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[考研] 材料085601调剂 +25 何润采123 2026-04-10 27/1350 2026-04-10 23:17 by Ftglcn90
[基金申请] 有爆料，一个青年教师卖房得400万，然后换了一个四青帽子 +9 babu2015 2026-04-08 9/450 2026-04-10 11:43 by 苏东坡二世
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 材料工程322 +18 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 19/950 2026-04-09 10:44 by cymywx
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 调剂 +4 mcbbc 2026-04-06 5/250 2026-04-07 12:33 by upczlm1989
[考研] 软工学硕299求调剂 +6 useryy 2026-04-07 6/300 2026-04-07 09:50 by vgtyfty
[考研] 085100建筑学 寻求跨专业调剂 一志愿南大294分 校级省级国家级奖项若干 踏实肯干 +3 1021075758 2026-04-06 4/200 2026-04-07 09:23 by 蓝云思雨
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程，初试344求专硕调剂 +6 15933906766 2026-04-05 6/300 2026-04-06 13:21 by 无际的草原
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭