24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 6516  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 以质粒为模板做pcr时要不要稀释? 已有4人参与

我新设计的引物在5端突变了几个碱基,以前的引物以质粒为模板扩增不出来,而以双酶切产物的话就能扩增出来,现在新设计的引物下游引物不变,上游引物突变了几个碱基,以质粒和双酶切产物为模版都扩增不出来呢,这是为什么?是不是以质粒为模板时一般要进行稀释,要比pcr双酶切产物浓度低才可以?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:50:49
质粒需要稀释一下,我们一般都是稀释100-1000倍再做PCR
hehe
4楼2014-01-10 12:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:07
以质粒为模板,PCR要求浓度在0.1-10ng 之间 就可以 了
2楼2014-01-10 09:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-10 11:19:32
574759350: 金币+1 2014-01-10 13:51:09
有时候懒得计算质粒浓度,一般是50ul体系里面加入0.1~0.5ul的质粒作为模板。这里说的质粒是提取出来正常的浓度,就是比marker最亮的条带都亮很多,亮到刺眼的那种。有时候也会稀释5~10倍后再加0.5~1ul
你的日子如何,你的力量也必如何!
3楼2014-01-10 10:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxwu10016869

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
574759350: 金币+2 2014-01-10 13:50:40
引物5‘端碱基突变后,不能与模板配对,退火温度应降低。
5楼2014-01-10 13:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +19 xaw. 2026-04-11 19/950 2026-04-11 23:20 by labixiaoqiao
[考研] 070300化学279求调剂 +19 哈哈哈^_^ 2026-04-08 20/1000 2026-04-11 20:43 by stoner78
[考研] 268求调剂 +3 你好tg 2026-04-05 5/250 2026-04-11 16:45 by Delta2012
[考研] 22408 352分求调剂 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:42 by maddjdld
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 一志愿0703化学招61最终排名62化学求调剂 +24 招61排名62 2026-04-07 28/1400 2026-04-10 16:15 by yx54321
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 347材料专硕求调剂 +19 zj8215216 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:36 by 690616278
[考研] 一志愿2110,化学学硕310分,本科重点双非求调剂 +18 努力奋斗112 2026-04-08 18/900 2026-04-09 23:28 by wolf97
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所,有机化学356分找调剂 +11 Nadiums 2026-04-09 11/550 2026-04-09 18:04 by lijunpoly
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-05 15/750 2026-04-09 13:36 by 故人??
[考研] 308求调剂 +17 墨墨漠 2026-04-06 17/850 2026-04-09 09:25 by 壹往無前
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[考研] 333求调剂 +6 合乘杨习夕 2026-04-06 6/300 2026-04-07 09:44 by 猪会飞
[考研] 287分求调剂 有专利国奖一志愿哈工大085406 +6 白易辰 2026-04-06 7/350 2026-04-06 22:46 by 875465
信息提示
请填处理意见