【答案】应助回帖

» 猜你喜欢

胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有109人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复
推荐一些基础有机化学的实验教程已经有0人回复
探秘高分子世界：链动微观，筑就材料新篇已经有0人回复
科研赋能时尚宠物：检测护航，焕新养宠体验已经有0人回复
精测粗蛋白：以科研标尺，守品质核心已经有0人回复
解码碳水世界：科研探秘，赋能营养与应用已经有0人回复
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石已经有0人回复
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下已经有12人回复
求助分析电泳图已经有9人回复
跑胶marker跑得不清晰已经有16人回复
帮忙分析下PCR的条带已经有7人回复
PCR结果出现弥散现象已经有21人回复
pcr图片，求帮忙分析一下，那个条带最适合做回收用于载体构建已经有8人回复
同工酶电泳图片如何处理，请帮忙分析如下照片，谢谢已经有9人回复
逆转录-pcr图，就解已经有22人回复
PCR后跑电泳，整个泳道都很亮，怎么回事？已经有5人回复
为什么DGGE染色出来是这个样子，高手帮忙分析下原因吧？已经有6人回复
PCR好多次了，一直没结果，麻烦各位帮我看看是哪出问题了？已经有15人回复
rt-pcr图，请大神们帮助分析一下，急。。。谢谢。。。已经有20人回复
急求RT-PCR电泳图分析已经有22人回复
催化剂寿命的单位，请大家帮忙分析一下，谢谢已经有6人回复
PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧已经有12人回复
我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。已经有11人回复
求帮忙分析下菌液PCR检测结果已经有19人回复
求助高手分析DGGE图谱，附PCR图和DGGE图谱已经有6人回复
大家帮忙分析一下PCR电泳图已经有14人回复
【求助/交流】请大家帮忙分析一下PCR结果，谢谢！已经有27人回复
【求助/交流】样品PCR老是涂抹带是怎么回事已经有10人回复
【求助/交流】大家帮忙看下我的PCR电泳图，急！做了7.8次还是这样。已经有15人回复
【求助/交流】帮忙分析下荧光PCR扩增图谱已经有4人回复
【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因已经有12人回复

1楼2013-11-04 21:59:17

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:57:10

感觉模板用量太大。RNA反转录前跑胶了吗？一般反转录后的cDNA需要稀释5-10倍后取1μl为模板PCR。即使不稀释，用原液也不要3μl。是否用该cDNA为模板P其他基因，如内参？

2楼2013-11-05 09:27:34

一路向南_J

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 25.5
帖子: 17
在线: 7.6小时
虫号: 2593812
注册: 2013-08-12
专业: 临床兽医学

引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-05 09:27:34
感觉模板用量太大。RNA反转录前跑胶了吗？一般反转录后的cDNA需要稀释5-10倍后取1μl为模板PCR。即使不稀释，用原液也不要3μl。是否用该cDNA为模板P其他基因，如内参？

谢谢回贴！我会减小模版的量再试一下。反转录前没跑胶，看网上说RNA跑胶易降解，没跑过，用RNA需要跑多长时间？跑出来应该是什么样的？另外，这内参指什么？没做过这个。。。还有，该PCR的退火温度需要改变吗？谢谢您的解答！

3楼2013-11-05 21:24:47

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-06 10:25:03

引用回帖:

3楼: Originally posted by 一路向南_J at 2013-11-05 21:24:47
谢谢回贴！我会减小模版的量再试一下。反转录前没跑胶，看网上说RNA跑胶易降解，没跑过，用RNA需要跑多长时间？跑出来应该是什么样的？另外，这内参指什么？没做过这个。。。还有，该PCR的退火温度需要改变吗？谢谢 ...

跑胶可以看RNA的完整性，是否有gDNA的污染。用较高电压跑10分钟左右。跑出来的是rRNA，主要是三条带。是不是内参不重要，主要是看一个肯定表达的基因，用你的cDNA是不是能P出来，确保cDNA样品的质量。

4楼2013-11-06 03:17:50

一路向南_J

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 25.5
帖子: 17
在线: 7.6小时
虫号: 2593812
注册: 2013-08-12
专业: 临床兽医学

引用回帖:

4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-06 03:17:50
跑胶可以看RNA的完整性，是否有gDNA的污染。用较高电压跑10分钟左右。跑出来的是rRNA，主要是三条带。是不是内参不重要，主要是看一个肯定表达的基因，用你的cDNA是不是能P出来，确保cDNA样品的质量。...

好的，谢谢您的高见，我跑RNA试一下。

5楼2013-11-07 20:09:01