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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮忙分析下PCR的条带
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daohaode4188

金虫 (小有名气)

[求助] 帮忙分析下PCR的条带

所有的实验条件都是一样的，除了操作的人不一样，目的基因是1500bp，除了9号其它基本上都出来了。。
用的DNA的大小是23130，9号的位置差不多也是23130bp。。大神们帮忙分析下原因。。
帮忙分析下PCR的条带
PCR副本jiaoyang324234.jpg
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1楼 2013-06-08 20:13:16
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zhoulubin

银虫 (小有名气)
加样误差
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-06-08 21:26:59
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wencheng1109

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
daohaode4188(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-09 09:18:57
你的4号不是也出了与9号相同大小的条带了么，我觉得做个梯度，我以前也遇到这样的情况。做了梯度后有结果了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-06-08 22:13:10
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daohaode4188

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wencheng1109 at 2013-06-08 22:13:10
你的4号不是也出了与9号相同大小的条带了么，我觉得做个梯度，我以前也遇到这样的情况。做了梯度后有结果了

额。。学校的课内试验。。问老师也不知道。。。所以问问。。能大概分析分析嘛~~
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4楼2013-06-08 23:01:56
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daohaode4188

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-08 21:26:59
加样误差

额，还不是太懂。。
提取的DNA是一样的，用的引物也是一样的，扩增出来的应该是目的基因才对，但是9号扩增出来的，跟原DNA模板的长度一样。。
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5楼2013-06-08 23:06:27
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
daohaode4188(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-09 09:19:17
"用的DNA的大小是23130，9号的位置差不多也是23130bp。。"，9号泳道可能就不是PCR，要说污染或者非特异性扩增，一般也没有如此整齐，应该比较弥散才对，9号的位置是不是就是用的DNA的电泳结果，走电泳加样时试剂可能加错了。
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6楼2013-06-08 23:31:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
daohaode4188: 金币+2, ★★★很有帮助, 样品的浓度确实不一样，这可能是出错的原因。。不过具体的机制还是不太明白。。为什么模板浓度高的话，就会非特异性扩增？ 2013-06-09 09:31:19
9号里23K的带应该就是你用的模板了。如果PCR产物跑成这样，说明模板用量太高，造成PCR失败。4号也有这条大带，但是没有9号多，所以勉强P出目的条带了。你把9号样品稀释一再P。
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7楼2013-06-09 00:33:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-09 00:33:07
9号里23K的带应该就是你用的模板了。如果PCR产物跑成这样，说明模板用量太高，造成PCR失败。4号也有这条大带，但是没有9号多，所以勉强P出目的条带了。你把9号样品稀释一再P。

模板浓度太高会增加模板自身的annealing，从而影响特异引物与模板annealing。所以模板浓度太高会影响PCR的特异性和效率，甚至完全P不出来。
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8楼2013-06-09 11:11:50
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