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轩尼骑士

新虫 (初入文坛)

[求助] 跑胶marker跑得不清晰


跑胶marker跑得不清晰
20131008_213356.jpg
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1楼 2013-10-10 08:27:54
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-10 10:00:59
胶没配好，或者M有问题了，从来没见过这样的M，再不清楚也得有几道亮的条带啊
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2楼2013-10-10 09:06:08
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ccchudi

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-10 10:01:09
好暗，电流多大啊？稳定不啊，感觉也是胶的问题呢
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3楼2013-10-10 09:24:33
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轩尼骑士

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ccchudi at 2013-10-10 09:24:33
好暗，电流多大啊？稳定不啊，感觉也是胶的问题呢

电流60mA，那你能告诉我你跑电泳是多大电压和电流啊，胶是1%的琼脂糖加的10000*sybr Green1核酸染料0.8ul，不知道有没有问题 求指教
谢谢
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4楼2013-10-10 17:06:13
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轩尼骑士

新虫 (初入文坛)
又跑了一次 还是这样
跑胶marker跑得不清晰-1
20131009_204920.jpg
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5楼2013-10-10 17:11:33
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ccchudi

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-10 23:56:07
引用回帖:
5楼: Originally posted by 轩尼骑士 at 2013-10-10 17:11:33
又跑了一次 还是这样

20131009_204920.jpg

我一直都用EB染色，110V恒压大约30~45min看情况了，胶浓度多用0.8%。你的缓冲液是TBE还是TAE？电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，可能产生条带模糊和不规则的DNA带迁移。再有，就是排除一下污染的可能性。换几管marmer，或者换一个批号的琼脂糖试试。。。。。
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6楼2013-10-10 19:01:20
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轩尼骑士

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ccchudi at 2013-10-10 19:01:20
我一直都用EB染色，110V恒压大约30~45min看情况了，胶浓度多用0.8%。你的缓冲液是TBE还是TAE？电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，可能产生条带模糊和不规则的DNA带迁移。再有，就是排除一下污染的可能性。换几管 ...

用的是TAE缓冲液，这个电泳液只是第二次用，应该不是这个的原因吧
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7楼2013-10-11 08:26:06
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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
好像看不到条带啊，我们一般是：一微升的marker混合一微升的loading buffer，共两微上样。
胶浓度是1%，电压：110V，跑大约35分钟，条带很清楚的。
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8楼2013-10-11 11:38:45
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轩尼骑士

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 猫di阁楼 at 2013-10-11 11:38:45
好像看不到条带啊，我们一般是：一微升的marker混合一微升的loading buffer，共两微上样。
胶浓度是1%，电压：110V，跑大约35分钟，条带很清楚的。

我们买的marker说明书上说自带loading buffer，不需要加，直接5微上的样
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9楼2013-10-11 13:32:38
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece
缓冲液少了没浸没胶！
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有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
10楼2013-10-11 15:02:21
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