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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跑胶跑出来老是有拖尾，怎么回事？
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lyaikele

金虫 (小有名气)

[求助] 跑胶跑出来老是有拖尾，怎么回事？

最近做PCR，跑胶跑出来老是有拖尾，无论是换引物还是换新药品都有不同程度的拖尾，为什么啊?
引物之前也用过，模版浓度，mg离子浓度以及跑胶的电压都跟以前的一样的，为什么最近做一直有拖尾啊？
愁人啊，哪位前辈给指点指点，拜托了？
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1楼 2013-05-19 19:38:12
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-20 09:36:39
gyesang: 回帖置顶 2013-05-21 00:45:32
楼主可以这样：1、把电泳槽的液体换一下试试，2、测下模板浓度和纯度，因为DNA模板浓度高了，不仅会有拖尾，还可能会没有PCR条带，3、加样时如果不用切胶回收，样品少加点
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要么读书，要么旅行，身体和灵魂，必须有一个在路上
5楼2013-05-20 09:35:30
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普通回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
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lyaikele(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 00:45:05
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2楼2013-05-20 08:45:36
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
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lyaikele(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 00:45:18
是不是水的问题，我貌似看过，拖尾是离子浓度过高造成的，不过那个是蛋白电泳，呵呵
希望对你有帮助
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3楼2013-05-20 09:00:22
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longrna

新虫 (正式写手)
上图。
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伟大航线....
4楼2013-05-20 09:02:26
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26264716

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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lyaikele(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 00:45:41
也有可能是胶没有打匀，多大的片段跑多少浓度的胶啊？？
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苦，才是人生
6楼2013-05-20 12:21:26
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yinhui93822

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lyaikele(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 00:45:50
可能是扩增问题…试下降低模版浓度、减少循环次数，或是升高Tm值、增加引物特异性

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2013-05-20 13:06:07
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lyaikele

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wickhamhan at 2013-05-20 08:45:36
marker拖尾不？如果marker拖尾，就换电泳buffer试试~如果marker不拖尾，减小样品上样量~

marker不拖，marker跑得很好，上样量5微应该不多吧
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8楼2013-05-20 22:12:31
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lyaikele

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sunnyboylg at 2013-05-20 09:35:30
楼主可以这样：1、把电泳槽的液体换一下试试，2、测下模板浓度和纯度，因为DNA模板浓度高了，不仅会有拖尾，还可能会没有PCR条带，3、加样时如果不用切胶回收，样品少加点

谢谢回复，我电泳液新配的，模版10ng应该算是标准的吧，现在的关键问题是换不同的引物，不同厂家的药品，甚至是不同的PCR仪，都有拖带... 我实在是不知道怎么办了。。。
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9楼2013-05-20 22:16:14
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lyaikele

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by longrna at 2013-05-20 09:02:26
上图。

看胶那仪器照相的坏了，明天用相机照一张，再麻烦帮我看看哈
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10楼2013-05-20 22:18:02
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