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lyaikele

金虫 (小有名气)

[求助] 跑胶跑出来老是有拖尾,怎么回事?

最近做PCR,跑胶跑出来老是有拖尾,无论是换引物还是换新药品都有不同程度的拖尾,为什么啊?
引物之前也用过,模版浓度,mg离子浓度以及跑胶的电压都跟以前的一样的,为什么最近做一直有拖尾啊?
愁人啊,哪位前辈给指点指点,拜托了?
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-20 09:36:39
gyesang: 回帖置顶 2013-05-21 00:45:32
楼主可以这样:1、把电泳槽的液体换一下试试,2、测下模板浓度和纯度,因为DNA模板浓度高了,不仅会有拖尾,还可能会没有PCR条带,3、加样时如果不用切胶回收,样品少加点
要么读书,要么旅行,身体和灵魂,必须有一个在路上
5楼2013-05-20 09:35:30
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普通回帖

匿名

用户注销 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
lyaikele(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-21 00:45:05
本帖仅楼主可见
2楼2013-05-20 08:45:36
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lyaikele(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-21 00:45:18
是不是水的问题,我貌似看过,拖尾是离子浓度过高造成的,不过那个是蛋白电泳,呵呵
希望对你有帮助
3楼2013-05-20 09:00:22
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longrna

新虫 (正式写手)

上图。
伟大航线....
4楼2013-05-20 09:02:26
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26264716

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lyaikele(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-21 00:45:41
也有可能是胶没有打匀,多大的片段跑多少浓度的胶啊??
苦,才是人生
6楼2013-05-20 12:21:26
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yinhui93822

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lyaikele(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-21 00:45:50
可能是扩增问题…试下降低模版浓度、减少循环次数,或是升高Tm值、增加引物特异性

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2013-05-20 13:06:07
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lyaikele

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wickhamhan at 2013-05-20 08:45:36
marker拖尾不?如果marker拖尾,就换电泳buffer试试~如果marker不拖尾,减小样品上样量~

marker不拖,marker跑得很好,上样量5微应该不多吧
8楼2013-05-20 22:12:31
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lyaikele

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sunnyboylg at 2013-05-20 09:35:30
楼主可以这样:1、把电泳槽的液体换一下试试,2、测下模板浓度和纯度,因为DNA模板浓度高了,不仅会有拖尾,还可能会没有PCR条带,3、加样时如果不用切胶回收,样品少加点

谢谢回复,我电泳液新配的,模版10ng应该算是标准的吧,现在的关键问题是换不同的引物,不同厂家的药品,甚至是不同的PCR仪,都有拖带... 我实在是不知道怎么办了。。。
9楼2013-05-20 22:16:14
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lyaikele

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by longrna at 2013-05-20 09:02:26
上图。

看胶那仪器照相的坏了,明天用相机照一张,再麻烦帮我看看哈
10楼2013-05-20 22:18:02
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