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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 这是我的page胶的图，有些奇怪，请大家给点意见，分析下，怎么会跑成这样
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410214185

新虫 (小有名气)

[求助] 这是我的page胶的图，有些奇怪，请大家给点意见，分析下，怎么会跑成这样

这是我的page胶的图，12%分离胶，5%浓缩胶，有些奇怪，请大家给点意见，分析下，怎么会跑成这样
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1楼 2011-09-28 22:13:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tianhuijuan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

优化跑胶时间和更改染色液。
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6楼2011-09-29 14:51:54
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普通回帖

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

410214185(金币+5): 可能是的吧，忘了用裂解液稀释了。。。 2011-10-22 19:57:06
考蓝染色的？
左起第2，3 道，上样量比较大
定量不准可能
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2楼2011-09-29 08:25:02
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求索寻觅

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得可能问题出在胶上，胶上有没有气泡？
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3楼2011-09-29 09:34:13
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-29 13:29:24
我认为可能有一下几个问题：
1：左起第2，3 道，上样量比较大，建议楼主减少上样量。
2：选择好点的染色液，胶图染色结果很差。
3：控制跑胶的时间。楼主marker最后一条带已经有一弥散了。根据楼主 目 的条带的大小控制跑胶时间。
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4楼2011-09-29 10:42:11
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-29 13:29:33
1、可能是胶的PH不对
2、样品中盐是不是太高
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5楼2011-09-29 12:21:46
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
跑胶的问题，弥散的蛋白质即使染色再好也是弥散，样品中根本看不出任何蛋白质条带，Ladder也弥散了。


我最近也为这事苦恼
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-09-29 17:20:49
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-09-29 17:20:49:
跑胶的问题，弥散的蛋白质即使染色再好也是弥散，样品中根本看不出任何蛋白质条带，Ladder也弥散了。


我最近也为这事苦恼

7楼你好。我查看了一些关于WB在跑电泳时，条带产生弥散的问题，答案各异。

现在我的蛋白样品跑浓缩胶时，还是能压成较好的条带，一旦它们跑入分离胶

后，就开始弥散，前后拉开宽度估计有1.5厘米，不知道实验中，你遇到该情况

没，请教一下。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
8楼2012-02-26 15:46:07
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
8楼: Originally posted by 2011加油 at 2012-02-26 15:46:07:
7楼你好。我查看了一些关于WB在跑电泳时，条带产生弥散的问题，答案各异。

现在我的蛋白样品跑浓缩胶时，还是能压成较好的条带，一旦它们跑入分离胶

后，就开始弥散，前后拉开宽度估计有1.5厘米，不知道实 ...

10厘米不到的分离胶，你的溴酚兰能拉开成1.5厘米，实在是太夸张了，我没见过。我的能拉开到0.5厘米不到，但是蛋白质条带很好，说明应该是溴酚兰的问题。溴酚兰拉得很开不一定蛋白质条带就弥散，我曾经试过蛋白质条带弥散但溴酚兰却能压成一条线看起来很好的，从那以后我把做胶和跑胶缓冲液换了，存放在4度，就很好了。你不妨试着换试剂。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2012-02-26 21:09:28
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-02-26 21:09:28:
10厘米不到的分离胶，你的溴酚兰能拉开成1.5厘米，实在是太夸张了，我没见过。我的能拉开到0.5厘米不到，但是蛋白质条带很好，说明应该是溴酚兰的问题。溴酚兰拉得很开不一定蛋白质条带就弥散，我曾经试过蛋白质 ...

我用的样品是去年年底的，放在负20度保存，用过两次，过年回来再用，这也有可能放久了。另外，我发现溴酚蓝有点稠，溶解得不是很好，稍微混匀加入了样品。前后拉宽太远确实分不清，到底是样品问题还是溴酚蓝问题。
多谢指教啊，你提到的溴酚蓝问题我会继续找找原因。
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10楼2012-02-27 15:01:42
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