应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » [求助]PCR后跑胶结果如图，请大家帮忙分析一下，谢谢各位
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 4340  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

一路向南_J

铁虫 (初入文坛)

[求助] [求助]PCR后跑胶结果如图，请大家帮忙分析一下，谢谢各位

提取RNA后反转录获cDNA，再进行PCR，跑胶后结果如图（目的片段280左右）。marker左边是用PCR mix做的，，前三个是样品（模板量为3ul，引物1ul），第四个是质粒做阳性对照（模板量为1ul，引物1ul）；marker右边是用Taq酶做的，前三个是样品（PCR buffer2.5ul，Mg1.5ul，dNTP 0.5ul，酶0.5ul，引物为0.5ul，模板5ul），第四个是质粒做阳性对照（PCR buffer2.5ul，Mg1.5ul，dNTP 0.5ul，酶0.5ul，引物为0.5ul，模板1ul），第五个是质粒做阳性对照（PCR buffer2.5ul，Mg1.5ul，dNTP 0.5ul，酶0.5ul，引物为1ul，模板1ul）。退火温度为56度，延伸时间为45秒，30个循环。
请各位帮我分析一下，用mix做的为什么会在点样空处特别亮？用Taq酶做的那一片亮是目的条带吗？应如何改进？
谢谢各位了！！
[求助]PCR后跑胶结果如图，请大家帮忙分析一下，谢谢各位
Administrator 2013-11-04 19hr 08min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-04 21:59:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一路向南_J

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-05 09:27:34
感觉模板用量太大。RNA反转录前跑胶了吗？一般反转录后的cDNA需要稀释5-10倍后取1μl为模板PCR。即使不稀释，用原液也不要3μl。是否用该cDNA为模板P其他基因，如内参？

谢谢回贴！我会减小模版的量再试一下。反转录前没跑胶，看网上说RNA跑胶易降解，没跑过，用RNA需要跑多长时间？跑出来应该是什么样的？另外，这内参指什么？没做过这个。。。还有，该PCR的退火温度需要改变吗？谢谢您的解答！
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-05 21:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:57:10
感觉模板用量太大。RNA反转录前跑胶了吗？一般反转录后的cDNA需要稀释5-10倍后取1μl为模板PCR。即使不稀释，用原液也不要3μl。是否用该cDNA为模板P其他基因，如内参？
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-05 09:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-06 10:25:03
引用回帖:
3楼: Originally posted by 一路向南_J at 2013-11-05 21:24:47
谢谢回贴！我会减小模版的量再试一下。反转录前没跑胶，看网上说RNA跑胶易降解，没跑过，用RNA需要跑多长时间？跑出来应该是什么样的？另外，这内参指什么？没做过这个。。。还有，该PCR的退火温度需要改变吗？谢谢 ...

跑胶可以看RNA的完整性，是否有gDNA的污染。用较高电压跑10分钟左右。跑出来的是rRNA，主要是三条带。是不是内参不重要，主要是看一个肯定表达的基因，用你的cDNA是不是能P出来，确保cDNA样品的质量。
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-06 03:17:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一路向南_J

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-06 03:17:50
跑胶可以看RNA的完整性，是否有gDNA的污染。用较高电压跑10分钟左右。跑出来的是rRNA，主要是三条带。是不是内参不重要，主要是看一个肯定表达的基因，用你的cDNA是不是能P出来，确保cDNA样品的质量。...

好的，谢谢您的高见，我跑RNA试一下。
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-07 20:09:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 320分人工智能调剂 +6 振—TZ 2026-04-03 6/300 2026-04-04 01:05 by Dream007008
[考研] 266求调剂 +6 学员97LZgn 2026-04-03 6/300 2026-04-04 00:00 by userper
[考研] 320调剂 +4 农业工程与信息� 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:40 by lbsjt
[考研] 283分求调剂 +6 小聂爱学习 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by zhq0425
[考研] 329求调剂 +9 miaodesi 2026-04-02 11/550 2026-04-03 18:28 by ls刘帅
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +14 芋泥小铃铛 2026-03-28 14/700 2026-04-03 15:36 by 晴空210210
[考研] 求调剂 +4 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:07 by zrongyan
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 285求调剂 +6 FZAC123 2026-03-30 6/300 2026-04-03 12:22 by xingguangj
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 348求调剂 +11 zzzzyk123 2026-04-01 11/550 2026-04-02 16:52 by Wang200018
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业 +6 what张 2026-04-01 7/350 2026-04-02 16:48 by zzsw+
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +8 cs0106 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:36 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +11 萝卜炖青菜 2026-03-28 12/600 2026-03-31 17:54 by xhai2011
[考研] 0856 335分 +9 cccchenso 2026-03-29 9/450 2026-03-31 16:37 by lishahe
[考研] 353求调剂 +3 江上枫_26 2026-03-28 3/150 2026-03-31 15:53 by jp9609
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭