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1楼2013-11-04 21:59:17

一路向南_J

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-05 09:27:34
感觉模板用量太大。RNA反转录前跑胶了吗？一般反转录后的cDNA需要稀释5-10倍后取1μl为模板PCR。即使不稀释，用原液也不要3μl。是否用该cDNA为模板P其他基因，如内参？

谢谢回贴！我会减小模版的量再试一下。反转录前没跑胶，看网上说RNA跑胶易降解，没跑过，用RNA需要跑多长时间？跑出来应该是什么样的？另外，这内参指什么？没做过这个。。。还有，该PCR的退火温度需要改变吗？谢谢您的解答！

3楼2013-11-05 21:24:47

查看全部 5 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:57:10

感觉模板用量太大。RNA反转录前跑胶了吗？一般反转录后的cDNA需要稀释5-10倍后取1μl为模板PCR。即使不稀释，用原液也不要3μl。是否用该cDNA为模板P其他基因，如内参？

2楼2013-11-05 09:27:34

cicelyzh

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 一路向南_J at 2013-11-05 21:24:47
谢谢回贴！我会减小模版的量再试一下。反转录前没跑胶，看网上说RNA跑胶易降解，没跑过，用RNA需要跑多长时间？跑出来应该是什么样的？另外，这内参指什么？没做过这个。。。还有，该PCR的退火温度需要改变吗？谢谢 ...

跑胶可以看RNA的完整性，是否有gDNA的污染。用较高电压跑10分钟左右。跑出来的是rRNA，主要是三条带。是不是内参不重要，主要是看一个肯定表达的基因，用你的cDNA是不是能P出来，确保cDNA样品的质量。

4楼2013-11-06 03:17:50

一路向南_J

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引用回帖:

4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-06 03:17:50
跑胶可以看RNA的完整性，是否有gDNA的污染。用较高电压跑10分钟左右。跑出来的是rRNA，主要是三条带。是不是内参不重要，主要是看一个肯定表达的基因，用你的cDNA是不是能P出来，确保cDNA样品的质量。...

好的，谢谢您的高见，我跑RNA试一下。

5楼2013-11-07 20:09:01