应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » [求助]蓝白斑筛选不长菌
51/1返回列表
查看: 2115  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

幻影望晴

新虫 (初入文坛)

[求助] [求助]蓝白斑筛选不长菌 已有1人参与

之前做过很多次都没出现过这个问题，这次也是按照原来的方法做的，竟然不长菌。载体是天根的pGM-T，感受态是JM109，目的片段500bp左右，也是用天根的胶回收做的。失败后，考虑了连接和感受态细胞的问题。
1.连接的验证
模板：载体试剂盒中的control insert DNA(700bp)
引物：SP6、T7
结果：

2.感受态细胞
本来以为是我的JM109是不是传代出现问题了，用新的JM109做的。
A.连接载体转入CP cell，37度振荡培养1h后，有晕状浑浊出现，涂于LB+（表面涂有IPTG16μl，X-gal 40μl)平板培养基，37度培养15小时，不长菌。
B.单独的CP cell分别涂了LB+和LB-两个平板培养基，两个都长菌了，涂LB-的长的比LB+的多。

真的是特别的郁闷，请大家多多指教！先说声谢谢！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-29 09:52:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幻影望晴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shouyishuo at 2013-11-02 09:49:19
别的不说，单纯从你描述的感受态验证的结果就发现一个问题：单纯的感受态涂LB+是不能够长菌的，涂LB-长菌是正常的...现在涂LB+的都长菌了，可能是制备的感受态被污染了，或者说不纯...

是这个问题的，之后重新做了一下，LB+就没有长菌了，但是目的基因的连接转化后仍然不长菌，我在考虑是不是连接出现问题了，但是如果连接出现问题的话我还不知道要怎么验证，不知道确切的原因
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-04 16:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

幻影望晴

新虫 (初入文坛)
咦！！图怎么没出现呢！补一张
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-29 09:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幻影望晴

新虫 (初入文坛)
第一次发图，不太懂，不好意思！！
[img]http://529688.m2.ihompy.com.cn/201310/29/529688_1383010606VQcF690.jpg[img]
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-29 09:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shouyishuo

铜虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:47:18
别的不说，单纯从你描述的感受态验证的结果就发现一个问题：单纯的感受态涂LB+是不能够长菌的，涂LB-长菌是正常的...现在涂LB+的都长菌了，可能是制备的感受态被污染了，或者说不纯...
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-11-02 09:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学336分求调剂 +3 zbzihdhd 2026-03-15 4/200 2026-03-16 23:52 by zbzihdhd
[考研] 302求调剂 +3 小贾同学123 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:39 by zhq0425
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 5/250 2026-03-16 10:50 by 我可以上岸的对�
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭