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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选问题
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易翔仪冲

新虫 (初入文坛)

[交流] 蓝白斑筛选问题 已有5人参与

昨天涂得板子，今天一看一片蓝色，（白色菌落刚拿出来的时候好像有那么几个，不知道放4度放一段时间之后会不会变蓝），是不是因为涂得X-gal浓度多了一倍？
望高人指点！
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1楼 2013-06-12 10:35:53
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-12 21:00:10
从蓝白斑筛选原理来说，这与所加过量的X-gal 无关，与载体是否插入目的片段相关……
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易翔仪冲
2楼2013-06-12 13:51:49
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普通回帖

cute_man

铜虫 (小有名气)
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按照操作来，应该是没有问题的。跟x-gal关系不大，不过一片蓝色，你的涂板浓度可能太大，加个抗生素筛选会好很多的。
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3楼2013-06-13 21:08:48
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易翔仪冲

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
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2楼: Originally posted by yujitianqing at 2013-06-12 13:51:49
从蓝白斑筛选原理来说，这与所加过量的X-gal 无关，与载体是否插入目的片段相关……

好的~~，谢谢！
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4楼2013-06-14 09:45:07
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易翔仪冲

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yujitianqing at 2013-06-12 13:51:49
从蓝白斑筛选原理来说，这与所加过量的X-gal 无关，与载体是否插入目的片段相关……

我连接的是T载体，一般来说不是很好连的，我怎么就连不上呢？
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5楼2013-06-14 09:47:50
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by 易翔仪冲 at 2013-06-14 09:47:50
我连接的是T载体，一般来说不是很好连的，我怎么就连不上呢？...

如果你用的试剂盒，还是比较容易的。如果目的片段比较大，就不容易连接。连接酶质量、连接的条件、目的基因、载体浓度及比例也可能影响连接效率。
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6楼2013-06-17 12:18:08
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
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6楼: Originally posted by yujitianqing at 2013-06-17 12:18:08
如果你用的试剂盒，还是比较容易的。如果目的片段比较大，就不容易连接。连接酶质量、连接的条件、目的基因、载体浓度及比例也可能影响连接效率。...

请问和T载体链接也要连接酶吗？不是按照说明书T-vector,自己的片段，solution就可以了吗？我一直连不上去，不知道什么原因了。
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7楼2013-06-17 20:32:34
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匿名

用户注销 (著名写手)
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8楼2013-06-17 21:50:40
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-06-17 20:32:34
请问和T载体链接也要连接酶吗？不是按照说明书T-vector,自己的片段，solution就可以了吗？我一直连不上去，不知道什么原因了。...

当然需要连接酶，否则3’-5’磷酸二酯键难以自行连接，有些公司直接将酶和缓冲液混合好了，做的时候就不需要分开再加连接酶。连接不上原因很多。
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9楼2013-06-17 22:14:13
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稀巴烂

银虫 (初入文坛)
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我都是放4度放了两三天让其显色，不然很容易挑到蓝斑，如果一大片蓝色，楼主要么还是重新连接转化吧~呵呵
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10楼2013-06-18 15:42:59
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