应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » [求助]蓝白斑筛选不长菌
71/1返回列表
查看: 2122  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

幻影望晴

新虫 (初入文坛)

[求助] [求助]蓝白斑筛选不长菌 已有1人参与

之前做过很多次都没出现过这个问题，这次也是按照原来的方法做的，竟然不长菌。载体是天根的pGM-T，感受态是JM109，目的片段500bp左右，也是用天根的胶回收做的。失败后，考虑了连接和感受态细胞的问题。
1.连接的验证
模板：载体试剂盒中的control insert DNA(700bp)
引物：SP6、T7
结果：

2.感受态细胞
本来以为是我的JM109是不是传代出现问题了，用新的JM109做的。
A.连接载体转入CP cell，37度振荡培养1h后，有晕状浑浊出现，涂于LB+（表面涂有IPTG16μl，X-gal 40μl)平板培养基，37度培养15小时，不长菌。
B.单独的CP cell分别涂了LB+和LB-两个平板培养基，两个都长菌了，涂LB-的长的比LB+的多。

真的是特别的郁闷，请大家多多指教！先说声谢谢！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-29 09:52:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幻影望晴

新虫 (初入文坛)
咦！！图怎么没出现呢！补一张
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-29 09:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幻影望晴

新虫 (初入文坛)
第一次发图，不太懂，不好意思！！
[img]http://529688.m2.ihompy.com.cn/201310/29/529688_1383010606VQcF690.jpg[img]
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-29 09:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shouyishuo

铜虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:47:18
别的不说，单纯从你描述的感受态验证的结果就发现一个问题：单纯的感受态涂LB+是不能够长菌的，涂LB-长菌是正常的...现在涂LB+的都长菌了，可能是制备的感受态被污染了，或者说不纯...
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-11-02 09:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幻影望晴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shouyishuo at 2013-11-02 09:49:19
别的不说，单纯从你描述的感受态验证的结果就发现一个问题：单纯的感受态涂LB+是不能够长菌的，涂LB-长菌是正常的...现在涂LB+的都长菌了，可能是制备的感受态被污染了，或者说不纯...

是这个问题的，之后重新做了一下，LB+就没有长菌了，但是目的基因的连接转化后仍然不长菌，我在考虑是不是连接出现问题了，但是如果连接出现问题的话我还不知道要怎么验证，不知道确切的原因
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-04 16:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shouyishuo

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 幻影望晴 at 2013-11-04 16:11:26
是这个问题的，之后重新做了一下，LB+就没有长菌了，但是目的基因的连接转化后仍然不长菌，我在考虑是不是连接出现问题了，但是如果连接出现问题的话我还不知道要怎么验证，不知道确切的原因...

不好意思，很久没上论坛了，不知道你的T克隆连接成功没有？
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-11 20:22:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-12 00:37:47
……这个问题还真棘手%LB没有涂抗生素？那么蓝白斑就算长起来也不保险……
赞一下 回复此楼
我不会！
7楼2013-12-11 22:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 幻影望晴 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +10 大米饭！ 2026-03-15 13/650 2026-03-17 06:57 by laoshidan
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中农业大学071010，总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭