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幻影望晴

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 526.1
帖子: 48
在线: 62.3小时
虫号: 2414097
注册: 2013-04-12
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] [求助]蓝白斑筛选不长菌已有1人参与

之前做过很多次都没出现过这个问题，这次也是按照原来的方法做的，竟然不长菌。载体是天根的pGM-T，感受态是JM109，目的片段500bp左右，也是用天根的胶回收做的。失败后，考虑了连接和感受态细胞的问题。
1.连接的验证
模板：载体试剂盒中的control insert DNA(700bp)
引物：SP6、T7
结果：

2.感受态细胞
本来以为是我的JM109是不是传代出现问题了，用新的JM109做的。
A.连接载体转入CP cell，37度振荡培养1h后，有晕状浑浊出现，涂于LB+（表面涂有IPTG16μl，X-gal 40μl)平板培养基，37度培养15小时，不长菌。
B.单独的CP cell分别涂了LB+和LB-两个平板培养基，两个都长菌了，涂LB-的长的比LB+的多。

真的是特别的郁闷，请大家多多指教！先说声谢谢！！

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1楼 2013-10-29 09:52:53

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三蛰

铜虫 (小有名气)

应助: 77 (初中生)
金币: 4.6
散金: 74
红花: 6
帖子: 241
在线: 96.9小时
虫号: 2160342
注册: 2012-12-02
性别: GG
专业: 食品科学基础

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-12 00:37:47

……这个问题还真棘手%LB没有涂抗生素？那么蓝白斑就算长起来也不保险……

我不会！

7楼2013-12-11 22:49:32

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