24小时热门版块排行榜    

查看: 669  |  回复: 4

liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] PCR电泳图求助。。

分子新手,最近做的PCR,为什么总是扩增出这样的条带?这是什么都木有扩增出来吗?

IMG_0003.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjtu0025

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liulugang: 金币+1 2013-05-07 14:27:17
请提高退火温度.特异性条带过多造成
2楼2013-05-06 22:58:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liulugang: 金币+2 2013-05-07 14:27:00
我也遇到过类似情况。一般原因就是非特异性扩增,也就是说你的引物不好用。如果你P的是菌液,还有可能是菌液过浓,蛋白含量太高。还用一种可能(比较低),你点样的时候loadingbuffer加的不够,样品没有沉到胶孔里,结果电泳的时候挂在孔上了。
顺便说一句,从你跑出的marker来看,这块胶做的不太均匀,琼脂糖明显没融好。
3楼2013-05-07 09:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 冰封之real at 2013-05-07 09:38:53
我也遇到过类似情况。一般原因就是非特异性扩增,也就是说你的引物不好用。如果你P的是菌液,还有可能是菌液过浓,蛋白含量太高。还用一种可能(比较低),你点样的时候loadingbuffer加的不够,样品没有沉到胶孔里, ...

我做的是57-66的梯度,pcr。引物设计直接用的人家文献里的,扩增的是文献作者赠与的菌上的基因。
4楼2013-05-07 14:24:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

saimintc

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liulugang: 金币+2, 有帮助 2013-07-16 20:14:42
第三行最上面不是有一个条带么。
退火不用太在意TM值,一般55度都可以的。(做点突变pcr的primer的tm值普遍75以上,也照样用55度无压力)
混合的时候在冰上混合,而且别怕麻烦多混几下。
循环数不要太高,一般循环数太高就出现这种拖带。
5楼2013-05-07 15:06:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liulugang 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 09:49 by G6APbkg8SA6w
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 09:39 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见