应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR有弥散带
111/2返回列表12下一页
查看: 1866  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

[求助] PCR有弥散带 已有1人参与

如图为我的PCR电泳图，前六个与后六个只有引物不同，前六个（从左到右）为不带酶切位点的引物，后六个为带酶切位点引物。前六个有目的带，如箭头所示，但是很弱，后六个全部为抹带。
pcr条件为：94                               1min
                  梯度退火（55-60）      30s
                  72                                140s     35个循环
目的片段大小约2500bp。
求教为什么会出现这么严重的弥散，为什么后六个只有弥散呢？很郁闷……
改怎样改进ｐｃｒ条件呢？

IMG_0547GGG.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

质粒构建

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
姥姥不疼，舅舅不爱
1楼 2013-03-14 17:00:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
为什么没人来呢？？求帮忙啊！
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
2楼2013-03-15 17:30:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
求关注啊！这PCR要P死我了啊~！
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
3楼2013-03-15 17:31:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小树虫

银虫 (小有名气)
很有意思，(猜测下) 模板用量多少ng？ 是不是菌落PCR?
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-16 22:42:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-03-17 22:17:57
咆哮的白菜: 金币+5, ★有帮助, 是模板的问题 2013-03-19 16:32:12
第一 你的不加酶切位点的引物扩出来的带也不够亮，可能是模板浓度不对或者纯度不够，或者退火温度不对。不知道你的引物有多长，引物长了可以继续提高退火。第二，换了带酶切位点的引物后扩不出来，可能是引物的问题，加了酶切位点后不好退火了，引物变长了，应该提高退火温度。你应该检查下你的模板。
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-17 15:06:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小树虫 at 2013-03-16 22:42:07
很有意思，(猜测下) 模板用量多少ng？ 是不是菌落PCR?

模板的量没有测，估计是模板浓度不够。不是菌落ＰＣＲ。
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
6楼2013-03-18 08:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-03-17 15:06:13
第一 你的不加酶切位点的引物扩出来的带也不够亮，可能是模板浓度不对或者纯度不够，或者退火温度不对。不知道你的引物有多长，引物长了可以继续提高退火。第二，换了带酶切位点的引物后扩不出来，可能是引物的问题 ...

退火温度从５５－６０都试了，估计是模板不行，换个模板再试试。
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
7楼2013-03-18 08:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang宇微

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
咆哮的白菜: 金币+1, ★有帮助, 主要是看长相 2014-01-21 13:33:59
上样量太大也不行
赞一下 回复此楼
8楼2014-01-21 09:28:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhang宇微 at 2014-01-21 09:28:19
上样量太大也不行

谢谢这位妹子把我一年前的帖子翻出来，让我好好怀念一下以前的PCR岁月，虽然你没说中问题根本（最后是落脚在模板量问题上），但是看在妹子这么敬业的态度上（其实主要是看长相），给分！
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
9楼2014-01-21 13:36:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang宇微

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2014-01-21 13:36:09
谢谢这位妹子把我一年前的帖子翻出来，让我好好怀念一下以前的PCR岁月，虽然你没说中问题根本（最后是落脚在模板量问题上），但是看在妹子这么敬业的态度上（其实主要是看长相），给分！...

。。不是的我是来看基因敲除的，我的长相怎么了！！！！！我也是有姿势的！！！！！！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2014-01-21 19:41:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 咆哮的白菜 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 4/200 2026-03-16 21:52 by Losir
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭