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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

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[求助] PCR有弥散带已有1人参与

如图为我的PCR电泳图，前六个与后六个只有引物不同，前六个（从左到右）为不带酶切位点的引物，后六个为带酶切位点引物。前六个有目的带，如箭头所示，但是很弱，后六个全部为抹带。
pcr条件为：94                            1min
               梯度退火（55-60）    30s
               72                               140s    35个循环
目的片段大小约2500bp。
求教为什么会出现这么严重的弥散，为什么后六个只有弥散呢？很郁闷……
改怎样改进ｐｃｒ条件呢？

IMG_0547GGG.jpg

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姥姥不疼，舅舅不爱

1楼 2013-03-14 17:00:42

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咆哮的白菜

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引用回帖:

5楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-03-17 15:06:13
第一你的不加酶切位点的引物扩出来的带也不够亮，可能是模板浓度不对或者纯度不够，或者退火温度不对。不知道你的引物有多长，引物长了可以继续提高退火。第二，换了带酶切位点的引物后扩不出来，可能是引物的问题 ...

退火温度从５５－６０都试了，估计是模板不行，换个模板再试试。