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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

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专业: 植物病理学

[求助] PCR有弥散带已有1人参与

如图为我的PCR电泳图，前六个与后六个只有引物不同，前六个（从左到右）为不带酶切位点的引物，后六个为带酶切位点引物。前六个有目的带，如箭头所示，但是很弱，后六个全部为抹带。
pcr条件为：94                            1min
               梯度退火（55-60）    30s
               72                               140s    35个循环
目的片段大小约2500bp。
求教为什么会出现这么严重的弥散，为什么后六个只有弥散呢？很郁闷……
改怎样改进ｐｃｒ条件呢？

IMG_0547GGG.jpg

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姥姥不疼，舅舅不爱

1楼 2013-03-14 17:00:42

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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

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求关注啊！这PCR要P死我了啊~！

姥姥不疼，舅舅不爱

3楼2013-03-15 17:31:15

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查看全部 11 个回答

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
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为什么没人来呢？？求帮忙啊！

姥姥不疼，舅舅不爱

2楼2013-03-15 17:30:19

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小小树虫

银虫 (小有名气)

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专业: 植物病理学

很有意思，(猜测下) 模板用量多少ng？是不是菌落PCR?

4楼2013-03-16 22:42:07

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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

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专业: 河口海岸学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-03-17 22:17:57
咆哮的白菜: 金币+5, ★有帮助, 是模板的问题 2013-03-19 16:32:12

第一你的不加酶切位点的引物扩出来的带也不够亮，可能是模板浓度不对或者纯度不够，或者退火温度不对。不知道你的引物有多长，引物长了可以继续提高退火。第二，换了带酶切位点的引物后扩不出来，可能是引物的问题，加了酶切位点后不好退火了，引物变长了，应该提高退火温度。你应该检查下你的模板。

5楼2013-03-17 15:06:13

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