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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

[求助] PCR有弥散带 已有1人参与

如图为我的PCR电泳图,前六个与后六个只有引物不同,前六个(从左到右)为不带酶切位点的引物,后六个为带酶切位点引物。前六个有目的带,如箭头所示,但是很弱,后六个全部为抹带。
pcr条件为:94                               1min
                  梯度退火(55-60)      30s
                  72                                140s     35个循环
目的片段大小约2500bp。
求教为什么会出现这么严重的弥散,为什么后六个只有弥散呢?很郁闷……
改怎样改进pcr条件呢?

IMG_0547GGG.jpg
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姥姥不疼,舅舅不爱
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhang宇微 at 2014-01-21 09:28:19
上样量太大也不行

谢谢这位妹子把我一年前的帖子翻出来,让我好好怀念一下以前的PCR岁月,虽然你没说中问题根本(最后是落脚在模板量问题上),但是看在妹子这么敬业的态度上(其实主要是看长相),给分!
姥姥不疼,舅舅不爱
9楼2014-01-21 13:36:09
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查看全部 11 个回答

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

为什么没人来呢??求帮忙啊!
姥姥不疼,舅舅不爱
2楼2013-03-15 17:30:19
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

求关注啊!这PCR要P死我了啊~!
姥姥不疼,舅舅不爱
3楼2013-03-15 17:31:15
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小小树虫

银虫 (小有名气)

很有意思,(猜测下) 模板用量多少ng? 是不是菌落PCR?
4楼2013-03-16 22:42:07
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