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履霜木虫 (正式写手)
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[求助]
PCR产物不做纯化和胶回收，直接TA克隆可以吗？
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如题， 我做的巢式PCR，跑胶之后亮度很好，没有杂带。Taq酶里面预混有染料，我能不能直接连载体做克隆，用pMD18？手边没有胶回收试剂盒啊。 |
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4楼2013-03-06 11:19:28
cdl007
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做TA克隆时，直接用PCR产物跟pMD18载体连接，我的PCR产物结果较好，目标片段长度263bp，电泳时看不出非特异扩增，有引物二聚体。 克隆后，用含X-gal，IPTG，Amp的LB固体培养基平板筛选，看不到蓝白班，但有许多单菌落，挑单菌落于含1ml LB液体培养基的试管中摇菌10小时，用菌液PCR检测（所用引物于前面pcr的引物相同，反映条件也相同，只是94度预变性时间改为10分钟）。但是检测结果没有目的条带，只有100bp左右的引物二聚体。 想问问您，这是什么原因？ 非常谢谢！ |
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