24小时热门版块排行榜    

查看: 4909  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

履霜

木虫 (正式写手)

[求助] PCR产物不做纯化和胶回收,直接TA克隆可以吗?

如题,
我做的巢式PCR,跑胶之后亮度很好,没有杂带。Taq酶里面预混有染料,我能不能直接连载体做克隆,用pMD18?手边没有胶回收试剂盒啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

I measured love by the extent of my jealousy...
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无为书生

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 生物生物 at 2013-03-27 13:23:44
做TA克隆时,直接用PCR产物跟pMD18载体连接,我的PCR产物结果较好,目标片段长度263bp,电泳时看不出非特异扩增,有引物二聚体。
克隆后,用含X-gal,IPTG,Amp的LB固体培养基平板筛选,看不到蓝白班,但有许多单 ...

如果用pMD18,插入或没插入会有相应的蓝白斑,看不到蓝白斑我认为是你的pMD18很可能根本就没有转到菌里面,至于单菌落可能是污染的有氨苄抗性的杂菌,没有做,只是小推断。
10楼2013-03-27 15:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

无为书生

铁虫 (小有名气)

可以试试,T载体还是很好连的。不过PCR体系里有很多的东东,对连接有影响!
2楼2013-03-05 14:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 专家考核, 鼓励交流经验,呵呵 2013-03-06 17:18:16
不可,影响下面的酶切酶连活性
涉及酶的操作都不要疏忽,酶对反应条件相应要求较高,
pcr体系里,看着澄清透明,看不见的是pH值,盐离子浓度,都会给内切酶带来麻烦。

当然不排除有很小几率做出后续试验(本人师兄拿自来水都能提出RNA来,叹服),理论上一定要回收的
3楼2013-03-05 15:53:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zltj2008

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
履霜: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-06 13:10:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-06 17:18:24
不用盒子回收,用乙醇和醋酸钠沉淀,干燥后拿水溶了。再连T载体就行了
4楼2013-03-06 11:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-29 22:27 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:33 by 4qO8zhfjr2AX
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 21:32 by 4qO8zhfjr2AX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[基金申请] 面上意见出来了 +8 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 16/800 2026-08-29 20:45 by 黄鸟于飞Chao
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见