24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

履霜

木虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
金币: 3252.9
散金: 554
红花: 4
帖子: 401
在线: 143.8小时
虫号: 1495550
注册: 2011-11-16
性别: GG
专业: 发育生物学与生殖生物学

[求助] PCR产物不做纯化和胶回收，直接TA克隆可以吗？

如题，
我做的巢式PCR，跑胶之后亮度很好，没有杂带。Taq酶里面预混有染料，我能不能直接连载体做克隆，用pMD18？手边没有胶回收试剂盒啊。

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有265人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

目的基因片段胶回收后酶切，然后再跑胶后发现条带很弱，怎么改进（求助）已经有8人回复
关于克隆技术——pcr产物测序问题已经有16人回复
我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的已经有31人回复
线粒体基因控制区CR含重复序列，为什么PCR产物直接测序不准，而要纯化或者克隆再测序已经有12人回复
最近做T克隆都是阴性，怎么回事？已经有14人回复
请教PCR产物酶切后是否可以直接过柱纯化而不胶回收？已经有15人回复
胶回收后再次pcr无目的条带，急，望神人指点。。。已经有16人回复
平末端连接做不出来克隆已经有30人回复
高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上已经有26人回复
PCR产物凝胶回收、酶切等问题请教已经有7人回复
放线菌分子生物学鉴定已经有8人回复
做一个克隆所需的最短时间？比比谁更高效快速！已经有39人回复
求教关于用QIAquick PCR Purification Kit 是否能用来回收双酶切过的pcr产物已经有3人回复
天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR扩增产物是平末端还是带A尾巴？已经有8人回复
巢式PCR后不是单一带已经有11人回复
DGGE胶回收问题已经有13人回复
PCR产物纯化与回收已经有10人回复
PCR产物酶切检测不到东西是为什么已经有11人回复
【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体已经有26人回复
【求助/交流】急！克隆快做了一个月了，就是做不出来已经有24人回复
【求助/交流】测序问题：PCR产物未纯化测序会怎样？已经有9人回复
【求助】DGGE生产厂家已经有13人回复
【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！已经有9人回复
【求助/交流】基因克隆前PCR产物都要纯化吗？已经有15人回复

I measured love by the extent of my jealousy...

1楼2013-03-05 14:30:47

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

生物生物

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 14
帖子: 16
在线: 2.9小时
虫号: 2380645
注册: 2013-03-27
性别: GG

引用回帖:

5楼: Originally posted by beer胖 at 2013-03-07 21:52:06
最好是回收一下。
pcr产物里面的离子等对T克隆有影响，而且pcr产物也不能保证没有杂带，最终T克隆的转化子会很乱，可能不仅仅是自己想要的片段的转化子了。

做TA克隆时，直接用PCR产物跟pMD18载体连接，我的PCR产物结果较好，目标片段长度263bp，电泳时看不出非特异扩增，有引物二聚体。
克隆后，用含X-gal，IPTG，Amp的LB固体培养基平板筛选，看不到蓝白班，但有许多单菌落，挑单菌落于含1ml LB液体培养基的试管中摇菌10小时，用菌液PCR检测（所用引物于前面pcr的引物相同，反映条件也相同，只是94度预变性时间改为10分钟）。但是检测结果没有目的条带，只有100bp左右的引物二聚体。
想问问您，这是什么原因？