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生物生物

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-27 15:45:20
如果用pMD18,插入或没插入会有相应的蓝白斑,看不到蓝白斑我认为是你的pMD18很可能根本就没有转到菌里面,至于单菌落可能是污染的有氨苄抗性的杂菌,没有做,只是小推断。...

您说:“pMD18很可能根本就没有转到菌里面”我是42度热激45秒,1分钟也试过,如果转不进去,会是哪里出了问题,怎么判断与改进呢?谢谢
11楼2013-03-27 20:56:48
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生物生物

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by cdl007 at 2013-03-27 13:33:34
没有目的条带,显然是没有转化进去
没有蓝白斑比较可疑,实际上应该说都是白斑,没有蓝斑吧?板子放4℃容易显蓝斑
如果你pcr出来,没有蓝斑,可能是x-gal出问题了
但是你pcr都没出来,那就重做连接,加大目的片 ...

全部试剂都是新买的,载体感受态也是。开始觉得做阳性对照,蓝白班麻烦,都直接用Amp筛选,没结果。用了蓝白班居然看不到蓝白班现象,做了3次都是一样
12楼2013-03-27 21:15:01
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无为书生

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 生物生物 at 2013-03-27 20:56:48
您说:“pMD18很可能根本就没有转到菌里面”我是42度热激45秒,1分钟也试过,如果转不进去,会是哪里出了问题,怎么判断与改进呢?谢谢...

多问问你师兄师姐吧,延长热激时间到90s,等等,这种基础操作总出问题的话,要找找自己的手法问题了!
13楼2013-03-28 08:52:34
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cdl007

木虫 (正式写手)

这个情况的话,好像感受态菌有问题,
你自己做一批吧,CaCL2 法,很容易,做一批实验室可以一直用。
菌种就用买来的
14楼2013-03-28 10:16:58
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