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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物不做纯化和胶回收，直接TA克隆可以吗？
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生物生物

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-27 15:45:20
如果用pMD18，插入或没插入会有相应的蓝白斑，看不到蓝白斑我认为是你的pMD18很可能根本就没有转到菌里面，至于单菌落可能是污染的有氨苄抗性的杂菌，没有做，只是小推断。...

您说：“pMD18很可能根本就没有转到菌里面”我是42度热激45秒，1分钟也试过，如果转不进去，会是哪里出了问题，怎么判断与改进呢？谢谢
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11楼2013-03-27 20:56:48
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生物生物

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cdl007 at 2013-03-27 13:33:34
没有目的条带，显然是没有转化进去
没有蓝白斑比较可疑，实际上应该说都是白斑，没有蓝斑吧？板子放4℃容易显蓝斑
如果你pcr出来，没有蓝斑，可能是x-gal出问题了
但是你pcr都没出来，那就重做连接，加大目的片 ...

全部试剂都是新买的，载体感受态也是。开始觉得做阳性对照，蓝白班麻烦，都直接用Amp筛选，没结果。用了蓝白班居然看不到蓝白班现象，做了3次都是一样
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12楼2013-03-27 21:15:01
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无为书生

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 生物生物 at 2013-03-27 20:56:48
您说：“pMD18很可能根本就没有转到菌里面”我是42度热激45秒，1分钟也试过，如果转不进去，会是哪里出了问题，怎么判断与改进呢？谢谢...

多问问你师兄师姐吧，延长热激时间到90s，等等，这种基础操作总出问题的话，要找找自己的手法问题了！
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13楼2013-03-28 08:52:34
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cdl007

木虫 (正式写手)
这个情况的话，好像感受态菌有问题，
你自己做一批吧，CaCL2 法，很容易，做一批实验室可以一直用。
菌种就用买来的
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14楼2013-03-28 10:16:58
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