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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切鉴定时有目的带却没有质粒带怎么回事
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vivienxixi

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切鉴定时有目的带却没有质粒带怎么回事已有2人参与

求各位大虾，我目的基因连了pBI121，跑PCR时，目的条带很亮，可是酶切时，有微弱的目的条带，却没有质粒带，并且整个泳道上都有弥散状的，好似降解了似的，这是怎么回事啊，切了很多回了，酶也都换了，偶尔出现了质粒也很弱根本没法做回收，还望各路高手指教。同时给各位做实验郁闷的同志们，道声，我们都辛苦啦。郁闷俩月了都。。哎。。。。。
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1楼2010-11-12 21:22:35
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢交流 2010-11-13 11:49:37
原始载体酶切后条带没问题吧？
产生条带弥散的原因比较多,有可能质粒本身的问题，也有可能是酶的问题。把酶切时间减短试试
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2010-11-13 10:03:22
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vivienxixi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-13 10:03:22
原始载体酶切后条带没问题吧？
产生条带弥散的原因比较多,有可能质粒本身的问题，也有可能是酶的问题。把酶切时间减短试试

朱大兵？
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3楼2014-05-28 20:49:42
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smdsfy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先你提取未酶切之前的质粒有没有问题，跑胶了吗，浓度又是多少？要根据浓度确定你取多少量酶切
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4楼2014-05-29 11:10:13
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