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目的条带pcr之后，片段很暗 已有1人参与
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模板用的是别人构建好的表达载体，是滴在滤纸上溶出来的。经过pcr条带之后的目的条带很暗。而且用PCR产物做模板，进行2次PCR的时候，连目的片段都扩不出来了。求分析下原因。 原来用这个模板p过，一模一样的东西， 原来的条带很亮，只是原来用的是taq酶，片段长了，保真性不好。现在用高保真和taq进行pcr都是要么p不出来，要么片段很暗。 片段大小在4kb左右，暗的那4条是最近P的，maker用的是1k plus，亮的那2条带是上个月初p的，maker用的是15k maker。 求分析下原因啊，急求！！！  Administrator 2016-06-15 19 时 19 分.jpg  Administrator 2016-05-13 12 时 59 分.jpg |
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9楼2016-06-17 09:55:00
jiuzi59
铁杆木虫 (正式写手)
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3楼2016-06-16 19:22:30
原海亮
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【答案】应助回帖
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会不会是模板浓度不太好，可以将滤纸上的质粒融出来后做一次转化，以后需要模板直接摇菌提质粒，这样质粒的浓度及纯度应该比较好的，并且质粒作为模板，扩增还是相对比较容易的，如果引物没问题的话。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-06-16 22:26:50
5楼2016-06-17 00:07:32
