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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助啊，有DNA浓度，没有目的条带
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萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助啊，有DNA浓度，没有目的条带

P了好几天没有结果。。。
阳性对照检验PCR体系没有问题，觉得DNA没提出来，今天换方法提了一次测浓度是74.57微克每毫升，P完之后又测浓度是10000多，可是电泳还是没有条带啊！PS：阳性对照和我的目的片段差不多大，它却出来了，请各位大神分析一下问题在哪里啊？多谢了。。。
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1楼 2012-08-21 15:20:30
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王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-21 16:26:34
amisking: 回帖置顶 2012-08-21 20:02:01
萌主李萌萌: 金币+1, ★★★很有帮助, 多谢高手指教~ 2012-08-22 18:18:04
1、PCR后测DNA溶度是不太靠谱的，因为体系中有引物，dNTPs，还有模板，这都会导致你所测得溶度偏高。
2、可能的原因引物有问题，或试着去设置一个退火温度；Mg离子溶度过低，使聚合酶的活性下降，产物减少。当然，如果你的上样量是是根据你测得DNA溶度而推出的话，建议你上样时多上点。。。。。。
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3楼2012-08-21 16:01:28
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gungunak47

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-21 16:26:24
萌主李萌萌: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢你 2012-08-22 18:17:34
1.DNA可能是降解了，可以先检测一下DNA的质量，只测浓度的话不能说明DNA的提取质量，因为降解的DNA浓度也会很高，电泳+数据才更能说明问题。
2.P完之后测的浓度时1000多，这也属于正常，因为体系中有dNTIPs，还有DNA模板，测出来的浓度大也属于正常。
3.只有数据+电泳图才能说明问题，任何单独一个都不是很能说明提取质量。
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2楼2012-08-21 15:44:28
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萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gungunak47 at 2012-08-21 15:44:28
1.DNA可能是降解了，可以先检测一下DNA的质量，只测浓度的话不能说明DNA的提取质量，因为降解的DNA浓度也会很高，电泳+数据才更能说明问题。
2.P完之后测的浓度时1000多，这也属于正常，因为体系中有dNTIPs，还有D ...

先谢谢你，可是P完之后浓度是10000多，这也算正常吗？
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4楼2012-08-21 18:31:06
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萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-08-21 16:01:28
1、PCR后测DNA溶度是不太靠谱的，因为体系中有引物，dNTPs，还有模板，这都会导致你所测得溶度偏高。
2、可能的原因引物有问题，或试着去设置一个退火温度；Mg离子溶度过低，使聚合酶的活性下降，产物减少。当然， ...

另外我直接跑的DNA电泳也是没有结果。。。是不是一定就是DNA没提出来的问题了？
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5楼2012-08-21 18:33:46
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王礼鹏

金虫 (小有名气)
你是提的RNA再逆转录成cDNA，还是提取的基因组再从中调取目的基因？
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6楼2012-08-22 19:42:14
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jl860822

金虫 (正式写手)
我看有点奇怪，你提取完DNA有没有电泳检测一下？然后就是你的电泳系统有问题吗？如果你的电泳系统有问题，那么所有的问题都可以有个合理的解释了
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7楼2012-08-23 08:43:26
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萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-08-22 19:42:14
你是提的RNA再逆转录成cDNA，还是提取的基因组再从中调取目的基因？

是提取的基因组再从中调取目的基因
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8楼2012-08-23 10:02:26
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萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-23 08:43:26
我看有点奇怪，你提取完DNA有没有电泳检测一下？然后就是你的电泳系统有问题吗？如果你的电泳系统有问题，那么所有的问题都可以有个合理的解释了

电泳检不出来，我的电泳系统没有问题的，因为我的阳性对照能跑出来啊
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9楼2012-08-23 10:03:25
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jl860822

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 萌主李萌萌 at 2012-08-23 10:03:25
电泳检不出来，我的电泳系统没有问题的，因为我的阳性对照能跑出来啊...

这就很是奇怪了，你提取的gDNA有没有电泳？试一下，看看有没有条带
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10楼2012-08-23 10:38:51
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