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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 目的片段ECOR1和NOT1双酶切的时候切两次么？载体呢？产品书说两个酶可以在一个体系
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evil丶zero

金虫 (小有名气)

[求助] 目的片段ECOR1和NOT1双酶切的时候切两次么？载体呢？产品书说两个酶可以在一个体系已有2人参与

另外，PCR的产物在酶切前要胶回收么？
召唤大神~~~
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1楼2015-07-07 11:08:43
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是的，要胶回收，同时可以在一个体系里进行双酶切
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2楼2015-07-07 14:50:42
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
evil丶zero: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 非常感谢你的回复！我问了一下我老师，他说载体的话最好分开切，PCR后乙醇回收洗掉前面的PCR buffer 2015-07-10 08:36:37
这两个酶可以同时加在一个体系里，一起酶切，不用先切一次后再加另一个进行酶切，载体也是一样，可以同时加两个酶一起切，至于pcr产物是否要先胶回收，我个人经验如果跑出条带单一，可以不必先回收，可以将PCR产物进行乙醇沉淀然后直接进行酶切，酶切后再进行胶回收。
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3楼2015-07-07 20:23:26
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蒋草心心心

新虫 (初入文坛)
但是不建议同时双酶切，转化后容易自连出现假阳性。最好还是切一次回收后再切一次回收。
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4楼2017-08-27 10:17:24
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