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evil丶zero

金虫 (小有名气)

[求助] 目的片段ECOR1和NOT1双酶切的时候切两次么?载体呢?产品书说两个酶可以在一个体系 已有2人参与

另外,PCR的产物在酶切前要胶回收么?
召唤大神~~~
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是的,要胶回收,同时可以在一个体系里进行双酶切
123456
2楼2015-07-07 14:50:42
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
evil丶zero: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 非常感谢你的回复!我问了一下我老师,他说载体的话最好分开切,PCR后乙醇回收洗掉前面的PCR buffer 2015-07-10 08:36:37
这两个酶可以同时加在一个体系里,一起酶切,不用先切一次后再加另一个进行酶切,载体也是一样,可以同时加两个酶一起切,至于pcr产物是否要先胶回收,我个人经验如果跑出条带单一,可以不必先回收,可以将PCR产物进行乙醇沉淀然后直接进行酶切,酶切后再进行胶回收。
3楼2015-07-07 20:23:26
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蒋草心心心

新虫 (初入文坛)

但是不建议同时双酶切,转化后容易自连出现假阳性。最好还是切一次回收后再切一次回收。
4楼2017-08-27 10:17:24
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