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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求高手帮助：EcoR I 和Nde I双酶切pET28a（+）的纯化问题
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小郭tongxue

铁虫 (小有名气)

[求助] 求高手帮助：EcoR I 和Nde I双酶切pET28a（+）的纯化问题

EcoR I 和Nde I双酶切pET28a（+）后的片段可以不做切胶回收，直接做纯化么？切后的片段有一个很小的片段，直接纯化会有影响么？
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小郭tongxue

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1楼 2013-05-07 11:24:14
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小郭tongxue(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-08 02:06:02
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小郭tongxue at 2013-05-07 21:48:33
切完的片段有一个片段只有19bp，会有很大的影响么？...

可以直接纯化，很小的片段一般的纯化过程损失很大，基本不会回收到。
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6楼2013-05-07 23:22:09
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普通回帖

wsglpglp

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小郭tongxue(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-08 02:05:36
我做过hae 3酶切基因组dna就是直接酚氯仿抽提的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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逼自己一次，才知道自己有多优秀.
2楼2013-05-07 19:38:53
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小郭tongxue(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-08 02:05:49
跑胶回收后做ligation最好，否则以后背景杂，筛选克隆够你呛的。
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3楼2013-05-07 19:54:10
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小郭tongxue

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mitocam at 2013-05-07 19:54:10
跑胶回收后做ligation最好，否则以后背景杂，筛选克隆够你呛的。

切完的片段有一个片段只有19bp，会有很大的影响么？
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4楼2013-05-07 21:48:33
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小郭tongxue

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wsglpglp at 2013-05-07 19:38:53
我做过hae 3酶切基因组dna就是直接酚氯仿抽提的

非常感谢
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5楼2013-05-07 21:48:46
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小郭tongxue

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
非常感谢\^O^/

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2013-05-08 06:18:12
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莓林塔

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小郭tongxue at 2013-05-08 06:18:12
非常感谢\^O^/

我发的帖子都成 HOT 了- - 好尴尬，你觉得老师会看到么~~
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8楼2013-05-09 23:29:50
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莓林塔

木虫 (小有名气)
亲爱的你该点已完结了，事实证明0.9的浓度也能跑出条带呢~
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9楼2013-05-09 23:40:07
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tiehua406

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接纯化试剂盒纯化。。。一点问题都没有。。。一般切下来的片段不大于200bp都没有什么问题的。
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10楼2013-05-10 00:00:40
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