应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » EcoR1酶切体系
121/2返回列表12下一页
查看: 6508  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

木vs木

金虫 (小有名气)

[求助] EcoR1酶切体系

那位有EcoR1酶切体系，这几天做酶切，但总是切不出目的片段，质粒可以扩增出目的片段，测了质粒浓度，约2000纳克每微升

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
坚持就是胜利！
1楼2014-01-12 15:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
EcoRI有星号活性，建议酶切时质粒浓度不要太高。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

木vs木
hehe
5楼2014-01-12 20:26:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
你如果是转化后的鉴定，用10的体系，1的酶，稀释10倍后的质粒1,37度切3小时就可以检测。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2014-01-15 17:17:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-12 18:50:07
EcoRI这个酶很好用，跟体系关系不大
1.  确保你序列里面有EcoRI的识别位点
2.  确保你的EcoRI酶没有失活
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-01-12 16:19:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木vs木

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-12 16:19:52
EcoRI这个酶很好用，跟体系关系不大
1.  确保你序列里面有EcoRI的识别位点
2.  确保你的EcoRI酶没有失活

这个酶切位点是19-t自带的，酶也没问题

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
坚持就是胜利！
3楼2014-01-12 18:02:19
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木vs木 at 2014-01-12 18:02:19
这个酶切位点是19-t自带的，酶也没问题
...

那就是没有连上片段呗
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-01-12 19:24:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木vs木

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-12 20:26:34
EcoRI有星号活性，建议酶切时质粒浓度不要太高。

大约浓度多大合适？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
坚持就是胜利！
6楼2014-01-13 03:44:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 木vs木 at 2014-01-13 03:44:58
大约浓度多大合适？
...

我一般质粒浓度在200ng左右。50ul体系加35ul。
赞一下 回复此楼
hehe
7楼2014-01-13 08:04:02
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木vs木

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-13 08:04:02
我一般质粒浓度在200ng左右。50ul体系加35ul。...

我测了一下，我的在2000ng左右

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
坚持就是胜利！
8楼2014-01-14 01:58:59
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫天雪涯

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-15 17:28:31
看下你用哪个公司的酶，会有说明书的。
我一般是40ul体系，1.5ul的酶，4uL的buffer，剩下的加水和质粒，你那个质粒太浓了可以稀释十倍，大概200ng/ul
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

木vs木
9楼2014-01-14 14:41:15
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木vs木

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 漫天雪涯 at 2014-01-14 14:41:15
看下你用哪个公司的酶，会有说明书的。
我一般是40ul体系，1.5ul的酶，4uL的buffer，剩下的加水和质粒，你那个质粒太浓了可以稀释十倍，大概200ng/ul

好的，谢谢您

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
坚持就是胜利！
10楼2014-01-15 15:44:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 木vs木 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭