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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » EcoR1酶切体系
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木vs木

金虫 (小有名气)

[求助] EcoR1酶切体系

那位有EcoR1酶切体系，这几天做酶切，但总是切不出目的片段，质粒可以扩增出目的片段，测了质粒浓度，约2000纳克每微升

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坚持就是胜利！
1楼 2014-01-12 15:28:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
EcoRI有星号活性，建议酶切时质粒浓度不要太高。
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木vs木
hehe
5楼2014-01-12 20:26:34
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
你如果是转化后的鉴定，用10的体系，1的酶，稀释10倍后的质粒1,37度切3小时就可以检测。
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11楼2014-01-15 17:17:23
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普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-12 18:50:07
EcoRI这个酶很好用，跟体系关系不大
1.  确保你序列里面有EcoRI的识别位点
2.  确保你的EcoRI酶没有失活
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2楼2014-01-12 16:19:52
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木vs木

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-12 16:19:52
EcoRI这个酶很好用，跟体系关系不大
1.  确保你序列里面有EcoRI的识别位点
2.  确保你的EcoRI酶没有失活

这个酶切位点是19-t自带的，酶也没问题

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坚持就是胜利！
3楼2014-01-12 18:02:19
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木vs木 at 2014-01-12 18:02:19
这个酶切位点是19-t自带的，酶也没问题
...

那就是没有连上片段呗
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4楼2014-01-12 19:24:22
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木vs木

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-12 20:26:34
EcoRI有星号活性，建议酶切时质粒浓度不要太高。

大约浓度多大合适？

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6楼2014-01-13 03:44:58
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 木vs木 at 2014-01-13 03:44:58
大约浓度多大合适？
...

我一般质粒浓度在200ng左右。50ul体系加35ul。
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hehe
7楼2014-01-13 08:04:02
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木vs木

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-13 08:04:02
我一般质粒浓度在200ng左右。50ul体系加35ul。...

我测了一下，我的在2000ng左右

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8楼2014-01-14 01:58:59
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漫天雪涯

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-15 17:28:31
看下你用哪个公司的酶，会有说明书的。
我一般是40ul体系，1.5ul的酶，4uL的buffer，剩下的加水和质粒，你那个质粒太浓了可以稀释十倍，大概200ng/ul
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木vs木
9楼2014-01-14 14:41:15
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木vs木

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 漫天雪涯 at 2014-01-14 14:41:15
看下你用哪个公司的酶，会有说明书的。
我一般是40ul体系，1.5ul的酶，4uL的buffer，剩下的加水和质粒，你那个质粒太浓了可以稀释十倍，大概200ng/ul

好的，谢谢您

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10楼2014-01-15 15:44:07
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