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木vs木

金虫 (小有名气)

[求助] EcoR1酶切体系

那位有EcoR1酶切体系,这几天做酶切,但总是切不出目的片段,质粒可以扩增出目的片段,测了质粒浓度,约2000纳克每微升

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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
EcoRI有星号活性,建议酶切时质粒浓度不要太高。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

hehe
5楼2014-01-12 20:26:34
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

你如果是转化后的鉴定,用10的体系,1的酶,稀释10倍后的质粒1,37度切3小时就可以检测。
11楼2014-01-15 17:17:23
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普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-12 18:50:07
EcoRI这个酶很好用,跟体系关系不大
1.  确保你序列里面有EcoRI的识别位点
2.  确保你的EcoRI酶没有失活
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-01-12 16:19:52
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木vs木

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-12 16:19:52
EcoRI这个酶很好用,跟体系关系不大
1.  确保你序列里面有EcoRI的识别位点
2.  确保你的EcoRI酶没有失活

这个酶切位点是19-t自带的,酶也没问题

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坚持就是胜利!
3楼2014-01-12 18:02:19
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 木vs木 at 2014-01-12 18:02:19
这个酶切位点是19-t自带的,酶也没问题
...

那就是没有连上片段呗
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-01-12 19:24:22
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木vs木

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-12 20:26:34
EcoRI有星号活性,建议酶切时质粒浓度不要太高。

大约浓度多大合适?

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坚持就是胜利!
6楼2014-01-13 03:44:58
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 木vs木 at 2014-01-13 03:44:58
大约浓度多大合适?
...

我一般质粒浓度在200ng左右。50ul体系加35ul。
hehe
7楼2014-01-13 08:04:02
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木vs木

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-13 08:04:02
我一般质粒浓度在200ng左右。50ul体系加35ul。...

我测了一下,我的在2000ng左右

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8楼2014-01-14 01:58:59
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漫天雪涯

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-15 17:28:31
看下你用哪个公司的酶,会有说明书的。
我一般是40ul体系,1.5ul的酶,4uL的buffer,剩下的加水和质粒,你那个质粒太浓了可以稀释十倍,大概200ng/ul

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2014-01-14 14:41:15
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木vs木

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 漫天雪涯 at 2014-01-14 14:41:15
看下你用哪个公司的酶,会有说明书的。
我一般是40ul体系,1.5ul的酶,4uL的buffer,剩下的加水和质粒,你那个质粒太浓了可以稀释十倍,大概200ng/ul

好的,谢谢您

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10楼2014-01-15 15:44:07
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