24小时热门版块排行榜    

查看: 6660  |  回复: 11

木vs木

金虫 (小有名气)

[求助] EcoR1酶切体系

那位有EcoR1酶切体系,这几天做酶切,但总是切不出目的片段,质粒可以扩增出目的片段,测了质粒浓度,约2000纳克每微升

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

坚持就是胜利!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
EcoRI有星号活性,建议酶切时质粒浓度不要太高。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

hehe
5楼2014-01-12 20:26:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

你如果是转化后的鉴定,用10的体系,1的酶,稀释10倍后的质粒1,37度切3小时就可以检测。
11楼2014-01-15 17:17:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-12 18:50:07
EcoRI这个酶很好用,跟体系关系不大
1.  确保你序列里面有EcoRI的识别位点
2.  确保你的EcoRI酶没有失活
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-01-12 16:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木vs木

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-12 16:19:52
EcoRI这个酶很好用,跟体系关系不大
1.  确保你序列里面有EcoRI的识别位点
2.  确保你的EcoRI酶没有失活

这个酶切位点是19-t自带的,酶也没问题

[ 发自小木虫客户端 ]
坚持就是胜利!
3楼2014-01-12 18:02:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 木vs木 at 2014-01-12 18:02:19
这个酶切位点是19-t自带的,酶也没问题
...

那就是没有连上片段呗
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-01-12 19:24:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木vs木

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-12 20:26:34
EcoRI有星号活性,建议酶切时质粒浓度不要太高。

大约浓度多大合适?

[ 发自小木虫客户端 ]
坚持就是胜利!
6楼2014-01-13 03:44:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 木vs木 at 2014-01-13 03:44:58
大约浓度多大合适?
...

我一般质粒浓度在200ng左右。50ul体系加35ul。
hehe
7楼2014-01-13 08:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木vs木

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-13 08:04:02
我一般质粒浓度在200ng左右。50ul体系加35ul。...

我测了一下,我的在2000ng左右

[ 发自小木虫客户端 ]
坚持就是胜利!
8楼2014-01-14 01:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫天雪涯

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-15 17:28:31
看下你用哪个公司的酶,会有说明书的。
我一般是40ul体系,1.5ul的酶,4uL的buffer,剩下的加水和质粒,你那个质粒太浓了可以稀释十倍,大概200ng/ul

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2014-01-14 14:41:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木vs木

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 漫天雪涯 at 2014-01-14 14:41:15
看下你用哪个公司的酶,会有说明书的。
我一般是40ul体系,1.5ul的酶,4uL的buffer,剩下的加水和质粒,你那个质粒太浓了可以稀释十倍,大概200ng/ul

好的,谢谢您

[ 发自小木虫客户端 ]
坚持就是胜利!
10楼2014-01-15 15:44:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 木vs木 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程专硕调剂 +4 204818@lcx 2026-03-17 4/200 2026-03-17 16:58 by ruiyingmiao
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +6 SUICHILD 2026-03-12 6/300 2026-03-17 09:24 by 雾散后相遇lc
[考研] 301求调剂 +3 A_JiXing 2026-03-16 3/150 2026-03-17 08:21 by 无际的草原
[文学芳草园] 伙伴们,祝我生日快乐吧 +17 myrtle 2026-03-10 26/1300 2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
请填处理意见