24小时热门版块排行榜    

查看: 1865  |  回复: 4

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

[求助] 带酶切位点的片段连接平末端载体后,还能从平末端载体上酶切下来吗? 已有1人参与

用高保真扩一个3000的片段,然后要酶切连表达载体。
  想了一个办法觉得比较省事,但不知道可不可行,请大家帮我看看:
  我用带酶切位点的引物扩增我的目的片段,扩增出来的片段就应该是带有酶切位点的片段,末端是平末端。然后我连接平末端载体,由于片段上已经带有酶切位点,我再用酶把这个片段切下来,连接表达载体。
  当然更省事的办法是直接连表达载体,但是之前实验室同门做过,测序结果不好。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-11 16:35:35
就是应该这样做呀?连到克隆载体上才方便后续操作…不过平末端貌似没有一般的TA克隆效率低!

[ 发自小木虫客户端 ]
特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
2楼2014-11-11 10:22:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2014-11-11 10:22:39
就是应该这样做呀?连到克隆载体上才方便后续操作…不过平末端貌似没有一般的TA克隆效率低!

我用的平末端连接效率还不错,几乎百发百中。我看的文献也少,总觉得这么做不合常理,通常应该是不带酶切位点连克隆载体,测序,再用带酶切位点p下来,然后连接表达,再测序。真的是知其然不知其所以然。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-11-11 10:42:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
ggyy0911: 金币+3, ★★★很有帮助, 好的,那我知道了~ 2014-11-11 12:08:12
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-11 16:35:43
引用回帖:
3楼: Originally posted by ggyy0911 at 2014-11-11 10:42:34
我用的平末端连接效率还不错,几乎百发百中。我看的文献也少,总觉得这么做不合常理,通常应该是不带酶切位点连克隆载体,测序,再用带酶切位点p下来,然后连接表达,再测序。真的是知其然不知其所以然。
...

通常是这样,为了增加特异性扩增,有时候直接用带有酶切位点的引物扩基因组也是可以的!或者大都这么干…不想费事…

[ 发自小木虫客户端 ]
特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
4楼2014-11-11 10:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2014-11-11 10:48:23
通常是这样,为了增加特异性扩增,有时候直接用带有酶切位点的引物扩基因组也是可以的!或者大都这么干…不想费事…
...

好的,那我知道了~

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-11-11 12:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ggyy0911 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 7/350 2026-07-31 12:10 by syhhffkrym
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 3/150 2026-07-31 12:08 by syhhffkrym
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 6/300 2026-07-31 12:05 by syhhffkrym
[教师之家] 基础研究怎么拉横向,学校到款任务越来越多,难以完成 拉横向,都有哪些途径啊 +6 锦衣卫寒战 2026-07-28 6/300 2026-07-31 11:27 by syl200707
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液,是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +15 1234567wang 2026-07-25 19/950 2026-07-31 08:30 by ZJTJZ
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +8 布布和一二 2026-07-30 8/400 2026-07-31 01:51 by alongwaytogo
[基金申请] 系统今天又提示维护了,估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 微信指数没变化,科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 17/850 2026-07-30 20:10 by kissu88
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了? +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么? 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 没消息就是被刷了呗 +13 lambert2014 2026-07-24 14/700 2026-07-29 10:38 by msh145800
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了,我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
请填处理意见