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1楼2013-11-22 15:58:42

lyyjackey

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不好意思。上面的连接体系中solutionI:5uL

2楼2013-11-22 16:00:41

远方tony

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 16:27:27

是什么载体，载体的抗性查对了吗？别把板子的抗性弄错了。

把没学的都补回来。

3楼2013-11-22 16:06:56

zh10246

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-22 22:12:55

平末端是效率低些，也不至于一个斑也没有吧，转化时建议做好阳性对照，证实感受态是好的，确认你的连接片段有东西，胶回收有的时候没回收到，再做一次，如果不行，建议从头开始，重新设计引物，用合适的酶切位点，一个月没做出来载体，有点长了，这种实验一个星期就该做好。

4楼2013-11-22 19:12:05

脱水拂空

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你可以换一下T4连接酶可能效果会好些

5楼2013-11-22 21:28:59

lyyjackey

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 远方tony at 2013-11-22 16:06:56
是什么载体，载体的抗性查对了吗？别把板子的抗性弄错了。

是一个穿梭质粒，不是很常用的，抗性是没错的，氨苄抗性

6楼2013-11-24 07:51:32

lyyjackey

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引用回帖:

4楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-22 19:12:05
平末端是效率低些，也不至于一个斑也没有吧，转化时建议做好阳性对照，证实感受态是好的，确认你的连接片段有东西，胶回收有的时候没回收到，再做一次，如果不行，建议从头开始，重新设计引物，用合适的酶切位点，一 ...

对照是直接转空质粒的，结果是满板的菌，说明平板应该是没有问题的了。

7楼2013-11-24 07:52:13