| 查看: 4127 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
BamHI,SmaI平末端粘性末端连接问题
|
||
 最近一直在做工程菌构建问题，我的目的片段大约在1000bp左右，载体为7000左右，分别采用BamHI和SmaI对质粒和载体进行双酶切，片段是连到T载体上的，测序正确。PS:酶切位点不能更换了。分别双酶切后，割胶后胶回收。 连接体系如下： 片段：4uL 载体：1uL 连接酶：1uL（PS：TAKARA的solutionI连接酶） 在金属浴上16度连接过夜，转化JM109感受态。 感受态之前构建的连T载体转化效率都很高，目前还是在用同一批感受态。 已经做了近一个多月了，一直是平板上什么都没有，空空如也  。实验做得已不知所措，希望有这方面经验的可以耐心予以解答，感激不尽。 |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有212人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急求英文翻译，谢谢
已经有1人回复
- 求广宿主载体pUCP19的酶切图谱和相关资料
已经有3人回复
- 【分享】分子克隆实验专题-（二）酶切连接要点探讨
已经有15人回复
- 【求助/交流】大家的 DNAman 软件能够识别sal I酶切位点吗？试试看。
已经有7人回复
7楼2013-11-24 07:52:13
2楼2013-11-22 16:00:41
3楼2013-11-22 16:06:56
4楼2013-11-22 19:12:05
10