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BamHI,SmaI平末端粘性末端连接问题
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 最近一直在做工程菌构建问题，我的目的片段大约在1000bp左右，载体为7000左右，分别采用BamHI和SmaI对质粒和载体进行双酶切，片段是连到T载体上的，测序正确。PS:酶切位点不能更换了。分别双酶切后，割胶后胶回收。 连接体系如下： 片段：4uL 载体：1uL 连接酶：1uL（PS：TAKARA的solutionI连接酶） 在金属浴上16度连接过夜，转化JM109感受态。 感受态之前构建的连T载体转化效率都很高，目前还是在用同一批感受态。 已经做了近一个多月了，一直是平板上什么都没有，空空如也  。实验做得已不知所措，希望有这方面经验的可以耐心予以解答，感激不尽。 |
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