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alman001铜虫 (小有名气)
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菌液PCR条带大小总是和连接片段不一致啊！已有3人参与
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本人利用clontech的genome walker universal kit扩增一个基因的5'启动子序列，扩增出了800bp-3000bp大小不一的各种条带，然后切胶回收，连接到pMD19-T载体，转化大肠杆菌DH5a，之后挑单克隆做菌液PCR（用的是通用引物M13-F/R）。 问题来了： 我的菌液PCR分三种情况：a. 800bp的插入片段，菌液P出来还是800bp左右，这个比较正常 b.1000bp的插入片段，菌液P出来也是800bp左右，不正常 c.2000bp的插入片段，菌液P出来也是800bp左右，不正常 然后我把三种情况的菌液各挑出来3个去测序，发现三种情况之间测出来的结果一致性还比较高，为什么不同大小的片段P出来的条带大小都变小？？但是测序结果却比较相似，两者有什么联系吗？？？ 大家快来帮帮我啊！ |
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