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原孟子金虫 (小有名气)
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[求助]
菌落pcr跟酶切 已有6人参与
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如题，最近一直在做pcr-rflp,前几周是转化长不出菌来，这次好不容易长菌了，但是菌落pcr图谱亮带又不是很亮，又挑了一些菌试了一下，还是这样。酶切试了一下几乎只有两条亮带，跑了大约一个半小时，110V电压，虫子们，给点意见，哪里做错的节奏，不想再重新开始了，真的。。。都快崩溃了做实验做的，头晕  612.jpg  jlpcr612.jpg  mq612.jpg |
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2楼2015-06-13 07:07:41
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
原孟子(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-15 22:54:04
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你的菌落PCR貌似都不对呀，无论产物大小，菌落PCR的带应该是很单一很亮才对的啊 好的菌液PCR图是这样的 链接: http://pan.baidu.com/s/1dD0Hxlf 密码: g5qn |
3楼2015-06-13 10:59:06
原孟子
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4楼2015-06-13 12:15:16
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8楼2015-06-15 23:20:36
原孟子
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9楼2015-06-16 08:48:51
【答案】应助回帖
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原孟子: 金币+66, ★★★很有帮助 2015-06-24 11:02:45
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个人建议： 1）PCR产物一定要好，浓度足够，条带单一，可回收之后使用，尽量要新鲜。 2）酶的选择，有的酶虽然文献推荐的挺多，但不见得对所有样品都好用，选用4碱基酶，最好有自己的测序结果，看看序列上到底有多少酶切位点。（你这个明显的位点少，基本所有的菌都是那一两个酶切点，所以切出来都一样） 3）单切不好用是，可考虑双切。 |
10楼2015-06-16 14:30:46