| 查看: 1621 | 回复: 12 | ||
原孟子金虫 (小有名气)
|
[求助]
菌落pcr跟酶切 已有6人参与
|
如题，最近一直在做pcr-rflp,前几周是转化长不出菌来，这次好不容易长菌了，但是菌落pcr图谱亮带又不是很亮，又挑了一些菌试了一下，还是这样。酶切试了一下几乎只有两条亮带，跑了大约一个半小时，110V电压，虫子们，给点意见，哪里做错的节奏，不想再重新开始了，真的。。。都快崩溃了做实验做的，头晕  612.jpg  jlpcr612.jpg  mq612.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有208人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 空质粒做PCR也能P出目的条带
已经有13人回复
- 测序正确的片段双酶切连接表达载体，提质粒PCR验证后，还需要再次测序吗？
已经有11人回复
- PCR产物与PMD18-T连接不上
已经有19人回复
- 双酶切怎么操作才能完全彻底呢！
已经有27人回复
- 用1.5ml的EP管可以摇菌进行菌液PCR鉴定、保菌跟抽质粒吗？
已经有7人回复
- 菌落PCR明显有目标条带，酶切验证却不对，测序也没结果
已经有6人回复
- 求助：EcoRI 和 XhoI双酶切
已经有25人回复
- 双酶切的目的基因与质粒连接不上怎么办
已经有25人回复
- 酶切连接连不上，要死了
已经有23人回复
- 请问我的菌落PCR测序产物目的片段是什么
已经有23人回复
- Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切结果，目的条带有，可是另一条带比原来质粒还要大，怎么解释呢
已经有6人回复
- 单酶切失败。质粒验证显示正确，但是PCR验证与酶切验证出现很多问题，麻烦大家解决下
已经有4人回复
- 菌落PCR有杂带
已经有16人回复
- 如何检测目的片段转没转到质粒上？
已经有16人回复
- 单酶切切不开的原因？
已经有8人回复
- 大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带
已经有5人回复
- 用pMD 19-T做克隆之后用哪对通用引物做菌落PCR以及测序呢？
已经有7人回复
- 革兰氏阳性菌的PCR方法
已经有16人回复
- 我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。
已经有18人回复
- 载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？
已经有12人回复
- 菌落PCR多条带，还能往后做双酶切吗
已经有25人回复
- Xho1和EcoR1双酶切，切不开
已经有14人回复
- 载体和酶切片段连接的问题
已经有5人回复
- 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
已经有28人回复
- PCR鉴定与酶切鉴定
已经有11人回复
2楼2015-06-13 07:07:41
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
原孟子(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-15 22:54:04
感谢参与，应助指数 +1
原孟子(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-15 22:54:04
|
你的菌落PCR貌似都不对呀，无论产物大小，菌落PCR的带应该是很单一很亮才对的啊 好的菌液PCR图是这样的 链接: http://pan.baidu.com/s/1dD0Hxlf 密码: g5qn |
3楼2015-06-13 10:59:06
原孟子
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1136.4
- 红花: 2
- 帖子: 88
- 在线: 55.1小时
- 虫号: 2733533
- 注册: 2013-10-18
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
4楼2015-06-13 12:15:16
Tama二等兵
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 9.1
- 散金: 5
- 帖子: 48
- 在线: 26.4小时
- 虫号: 2880712
- 注册: 2013-12-18
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2015-06-14 10:31:58
6楼2015-06-15 16:17:04
7楼2015-06-15 18:28:57
8楼2015-06-15 23:20:36
原孟子
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1136.4
- 红花: 2
- 帖子: 88
- 在线: 55.1小时
- 虫号: 2733533
- 注册: 2013-10-18
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
9楼2015-06-16 08:48:51
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
原孟子: 金币+66, ★★★很有帮助 2015-06-24 11:02:45
原孟子: 金币+66, ★★★很有帮助 2015-06-24 11:02:45
|
个人建议： 1）PCR产物一定要好，浓度足够，条带单一，可回收之后使用，尽量要新鲜。 2）酶的选择，有的酶虽然文献推荐的挺多，但不见得对所有样品都好用，选用4碱基酶，最好有自己的测序结果，看看序列上到底有多少酶切位点。（你这个明显的位点少，基本所有的菌都是那一两个酶切点，所以切出来都一样） 3）单切不好用是，可考虑双切。 |
10楼2015-06-16 14:30:46
