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原孟子

金虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by Tama二等兵 at 2015-06-14 10:31:58
不是,退火温度设高点,摇菌时间长点...

条带不是很亮是不是不能送出去测序?会不会有杂质
认真吃饭,认真睡觉,认真生活。
11楼2015-06-17 13:14:00
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原孟子

金虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by xiaofeng521 at 2015-06-15 18:28:57
杂带多是引物不特异或者退火温度低,建议设计特异的引物,p的时候设置温度梯度。条带不亮可以多跑几个循环。

我用的都是通用引物,我不做特异性引物。
认真吃饭,认真睡觉,认真生活。
12楼2015-06-17 13:14:52
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原孟子

金虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by zhangyo at 2015-06-16 14:30:46
个人建议:
1)PCR产物一定要好,浓度足够,条带单一,可回收之后使用,尽量要新鲜。
2)酶的选择,有的酶虽然文献推荐的挺多,但不见得对所有样品都好用,选用4碱基酶,最好有自己的测序结果,看看序列上到底有多 ...

pcr产物回收后没测浓度,可能是这原因,酶切这样的条带能测序吗?我是新手,都不大明白,多谢指教哈。
认真吃饭,认真睡觉,认真生活。
13楼2015-06-17 13:16:32
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