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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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原孟子

金虫 (小有名气)

[求助] 菌落pcr跟酶切 已有6人参与

如题，最近一直在做pcr-rflp,前几周是转化长不出菌来，这次好不容易长菌了，但是菌落pcr图谱亮带又不是很亮，又挑了一些菌试了一下，还是这样。酶切试了一下几乎只有两条亮带，跑了大约一个半小时，110V电压，虫子们，给点意见，哪里做错的节奏，不想再重新开始了，真的。。。都快崩溃了做实验做的，头晕


菌落pcr跟酶切
612.jpg


菌落pcr跟酶切-1
jlpcr612.jpg


菌落pcr跟酶切-2
mq612.jpg
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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
1楼 2015-06-12 19:22:38
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原孟子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zhangyo at 2015-06-16 14:30:46
个人建议：
1）PCR产物一定要好，浓度足够，条带单一，可回收之后使用，尽量要新鲜。
2）酶的选择，有的酶虽然文献推荐的挺多，但不见得对所有样品都好用，选用4碱基酶，最好有自己的测序结果，看看序列上到底有多 ...

pcr产物回收后没测浓度，可能是这原因，酶切这样的条带能测序吗？我是新手，都不大明白，多谢指教哈。
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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
13楼2015-06-17 13:16:32
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名闯天下

木虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2015-06-15 22:53:28
师姐，我好笨，帮不了你什么。要不再做的时候带上我吧。没准就成功了呢？我还学习一下。

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2楼2015-06-13 07:07:41
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
原孟子(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-15 22:54:04
你的菌落PCR貌似都不对呀，无论产物大小，菌落PCR的带应该是很单一很亮才对的啊

好的菌液PCR图是这样的
链接: http://pan.baidu.com/s/1dD0Hxlf 密码: g5qn
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没有做不到，只有想不到！
3楼2015-06-13 10:59:06
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原孟子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-06-13 10:59:06
你的菌落PCR貌似都不对呀，无论产物大小，菌落PCR的带应该是很单一很亮才对的啊

好的菌液PCR图是这样的
链接: http://pan.baidu.com/s/1dD0Hxlf 密码: g5qn

对啊，不亮是不是菌转化那步没做好？

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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
4楼2015-06-13 12:15:16
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