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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr跟酶切
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原孟子

金虫 (小有名气)

[求助] 菌落pcr跟酶切 已有6人参与

如题，最近一直在做pcr-rflp,前几周是转化长不出菌来，这次好不容易长菌了，但是菌落pcr图谱亮带又不是很亮，又挑了一些菌试了一下，还是这样。酶切试了一下几乎只有两条亮带，跑了大约一个半小时，110V电压，虫子们，给点意见，哪里做错的节奏，不想再重新开始了，真的。。。都快崩溃了做实验做的，头晕


菌落pcr跟酶切
612.jpg


菌落pcr跟酶切-1
jlpcr612.jpg


菌落pcr跟酶切-2
mq612.jpg
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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
1楼 2015-06-12 19:22:38
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原孟子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaofeng521 at 2015-06-15 18:28:57
杂带多是引物不特异或者退火温度低，建议设计特异的引物，p的时候设置温度梯度。条带不亮可以多跑几个循环。

我用的引物都是通用的引物，但是我师兄做的条带都是很亮的。如果做特异性引物是不是针对一种菌，这方面不是很了解。

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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
9楼2015-06-16 08:48:51
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名闯天下

木虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2015-06-15 22:53:28
师姐，我好笨，帮不了你什么。要不再做的时候带上我吧。没准就成功了呢？我还学习一下。

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2楼2015-06-13 07:07:41
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
原孟子(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-15 22:54:04
你的菌落PCR貌似都不对呀，无论产物大小，菌落PCR的带应该是很单一很亮才对的啊

好的菌液PCR图是这样的
链接: http://pan.baidu.com/s/1dD0Hxlf 密码: g5qn
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没有做不到，只有想不到！
3楼2015-06-13 10:59:06
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原孟子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-06-13 10:59:06
你的菌落PCR貌似都不对呀，无论产物大小，菌落PCR的带应该是很单一很亮才对的啊

好的菌液PCR图是这样的
链接: http://pan.baidu.com/s/1dD0Hxlf 密码: g5qn

对啊，不亮是不是菌转化那步没做好？

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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
4楼2015-06-13 12:15:16
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